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乳酸菌を使用した新しいタンパク質発現システム NICE タンパク質発現システム

掲載日情報:2014/01/21 現在Webページ番号:3528

NICE( Nisin Controlled gene Expression system)は、乳酸菌 Lactococcus lactis を発現宿主とし、抗菌ペプチドであるナイシン(Nisin)により発現誘導を行うタンパク質発現システムです。

特長

  • 宿主が乳酸菌のため、エンドトキシンフリーの発現システムです。
  • 内在性のプロテアーゼ量が抑えられ、また外来のプロテアーゼが混入しません。
  • 封入体を形成しません。
  • タンパク質発現を厳密にコントロールできるため、宿主に対する毒性タンパク質の発現も容易です。
  • シンプルな培養条件のため容易にスケールアップができます。

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原理

ナイシンは 34 アミノ酸残基で構成される抗菌ペプチドです。ナイシンの生合成は 11 遺伝子のクラスターから成り、最初の nisA 遺伝子がナイシンの前駆体をコードしています。一方、他の遺伝子はナイシンの発現制御や修飾、プロセシング等に寄与しています。発現制御に関わる NisK はナイシンと結合すると自己リン酸化され、もうひとつの発現制御因子の NisR へリン酸基を転移します。この反応によって活性化された NisR は、nisA プロモーターを介してNisA の発現を誘導します。

本システムでは、nisA プロモーター、NisK、およびNisR を利用して、発現誘導を行います。
乳酸菌株 NZ9000 は、ナイシン非産生株である L. lactis subsp. cremoris MG1363 のゲノム内に nisK および nisR 遺伝子を組み込んで樹立した発現宿主株です。任意の遺伝子を発現ベクター上の nisA プロモーターの下流に組み込み、培地中にナイシンを添加することで、組み込んだ遺伝子の発現が誘導されます。

■参考文献

  1. Mierau, I. and M. Kleerebezem, Applied Microbiology and Biotechnology., 9, 1 ~ 13(2005).

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Expression Vector, Reference Plasmid

■ pZ8148

クロラムフェニコール耐性遺伝子を有する、広宿主域ベクターです。nisA プロモーター(Pnis)の下流にマルチクローニング部位があります。

■ pZ8149

lacF が含まれている広宿主域ベクターです。lacF 欠失宿主を使用して Lactose 添加培地で形質転換株を選択できます。

■ pZ8150

クロラムフェニコール耐性遺伝子を有する、広宿主域ベクターです。

■ pZ8008

ナイシンによる発現誘導試験のためのレポーターベクターです。nisA プロモーターの下流に、レポーター遺伝子として gusA (β -glucuronidase)遺伝子が組み込まれています。

■ pZ9530

nisR および nisK 遺伝子を含んでいます。pAM β1 を複製開始点とする低コピー数プラスミドです。

NICEタンパク質発現システム 関連性購入時のご注意

本製品は、大学・官公庁研究所(Academic)にご所属の方のみがご購入いただけます。
営利団体・企業(Commercial Entity)にご所属の方が購入するためには、NIZO food research社とのライセンス契約を締結していただく必要があります。詳細は当社テクニカルサポート 試薬担当(Tel. 035684-1620, Fax 03-5684-1775, e-mail:reagent@funakoshi.co.jp)までお問い合わせ下さい。

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Expression Strain

■ NZ9000

NICE システムの標準的な宿主株です。 nisK および nisR 遺伝子が組み込まれています。

■ NZ3900

lactose による形質転換体選択を行うための lacF 欠損株です。nisK および nisR 遺伝子が組み込まれています。

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■Nisin Kit

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(テクニカルサポート 試薬担当)

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