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活性型低分子量Gタンパク質の定量キット G-LISA Small G-Protein Activation Assay Biochem Kitシリーズ

掲載日情報:2020/03/09 現在Webページ番号:3251

細胞内の活性型低分子量Gタンパク質を,従来のプルダウン法よりも少ない試料量でより簡単に,短時間で定量できる96ウェルフォーマットのキットです。
低分子量Gタンパク質のRhoファミリーは少なくとも20種類存在することが明らかになっており,そのうちRhoA,Rac,Ras,Cdc42は主要なタンパク質として研究が進んでいます。これらの低分子量Gタンパク質はGTPase活性を有しており,細胞内ではGTPが結合した活性型とGDPが結合した不活性型として存在しています。

プレート外観

G-LISAプレート(8ウェルストリッププレート)

製品の種類へ キット内容

Rhoの活性化の測定

LPA(lysophosphatidic acid)によるRhoの活性化をG-LISAキット(#BK121)で測定した。Swiss 3T3,A431,HeLa細胞をそれぞれ血清飢餓状態(starved)で培養し,LPA処理により刺激した。細胞抽出物25μgをG-LISAアッセイに使用した。LPA刺激により細胞内の活性型Rhoが増加していることが分かる。




Rhoの活性化の測定

RhoA G-LISA Activation Assay (#BK124)を用いて,異なる濃度のCell Permeable Rho Inhibitor (#CT04)で処理したSwiss 3T3細胞におけるRho活性の測定結果。
Swiss 3T3細胞を無血清培地血清飢餓状態(starved)で培養し,異なる濃度のCell Permeable Rho Inhibitor (#CT04)で4時間処理または未処理の後にカルペプチン100μg/mlで10分間処理した。細胞を溶解後,RhoA G-LISA Activation Assay (#BK124)によりRhoA活性を測定した。Cell Permeable Rho Inhibitor(#CT04)2.0μg/mlで4時間処理した場合においては,Rho活性はほぼ完全に(90%)阻害された。


Rhoの活性化の測定

Swiss 3T3細胞にLPA 10μg/ml, calpeptin (#CN01) 100μg/ml,およびCNF (#CN03) 1μg/mlを処理し,RhoA活性の継時変化を測定した。Swiss 3T3細胞に各活性化因子で刺激し,Rhoの活性化をG-LISA Kit(#BK121)で分析した。LPAによる刺激は,Rhoの急速かつ一過性の活性化を誘導し2~分でピークに達した後に急激に基底レベルまで低下した。カルペプチンによる活性化は,10~30分でシグナルが増加し,60分後に基底レベルまで低下した。CNFによる活性化では,60分後にシグナルが増加し,最大12時間安定だった。

キット内容

製品の種類

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測定因子 品名 検出方法 アッセイ数 商品コード
Arf1 Arf1 G-LISA Activation Assay Kit 比色 96 assays BK132
Arf6 Arf6 G-LISA Activation Assay Kit 比色 96 assays BK133
Cdc42 Cdc42 G-LISA Activation Assay Kit 比色 24 assays BK127-S
96 assays BK127
Rac1 Rac1 G-LISA Activation Assay Kit 化学発光 96 assays BK126
比色 24 assays BK128-S
96 assays BK128
Rac1,2,3 Rac1,2,3 G-LISA Activation Assay Kit 比色 96 assays BK125
Ral Ral G-LISA Activation Assay Kit 比色 96 assays BK129
Ras Ras G-LISA Activation Assay Kit 比色 96 assays BK131
RhoA RhoA G-LISA Activation Assay Kit 化学発光 96 assays BK121
比色 24 assays BK124-S
96 assays BK124
Total RhoA Total RhoA G-LISA Activation Assay Kit 比色 96 assays BK150

G-LISA Bundle Kit, RhoA/Cdc42/Rac1

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測定因子 品名 検出方法 キット内容 アッセイ数 商品コード
RhoA/Cdc42/Rac1 G-LISA Bundle Kit, RhoA/Cdc42/Rac1 比色 #BK124-S+#BK127-S+#BK128-S 3 kits×24 assays BK135

キット内容

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特長

  • 各種の活性型低分子量Gタンパク質を特異的に認識するeffector-proteinの結合領域をあらかじめコーティングした96ウェルプレートを用いています。
  • 比色法で定量するタイプ(Colorimetric)と,より高感度な化学発光法で定量するタイプ(Luminescence*1)の製品があります。
  • RhoA,Rac1,Cdc42の3種類の比色定量キット(各24 assay分)をセットにした製品もあります(上記参照)。

*1 測定にはルミノメーターが必要です。

G-LISA化学発光法と比色法の比較

検出方法 化学発光 比色
アッセイ時間 <3 hr
細胞量 1~25μg/protein 21~50μg/protein
測定機器 ルミノメーター高感度
(100 ms/well)
プレートリーダー
測定波長 490 nm
検出限界(小分子Gプロテイン)*2 0.25 ng 0.50 ng
測定範囲 0.025~1.0 ng 0.05~2.0 ng
CV値(8回の平均値) 16% 12%

*2 ウェルに組換え体Rhoを加えて測定した結果

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G-LISAとプルダウン法(従来法)との比較

アッセイ方法 G-LISAシリーズ プルダウン法
必要試料量(1回当たり) 10~50μg Protein*3
(3 cmプレート)
500~2,000μg Protein
(100 cmプレート)
アッセイ時間 <3 hr 10~12 hr
最大試料数(1回当たり) 最大96試料 最大10試料
データの定量性 定量的 半定量的
ハイスループット測定 可能 不可能

*3 7.5~50μg Protein(#BK127

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操作方法概略

操作方法概略

  1. 細胞を溶解する。
  2. 細胞ライセートをG-protein-GTP-binding plateに添加し,30分間インキュベートする。
  3. 検出用抗体を加え,インキュベートする。
  4. 検出用試薬(発色/化学発光基質)を加えて測定する。

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G-LISA動画

下の画像のクリックで動画が再生されます。

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キット内容

共通コンポーネント

  • 96 well G-protein-GTP binding plate*3
  • Anti-G-protein antibody*3
  • Control G-protein*3
  • HRP-labeled secondary antibody
  • HRP detection reagent A/B*3
  • Wash buffer
  • Antigen presenting buffer

*3 キットにより内容は異なります。

その他のコンポーネント

キットコンポーネント A B C D
Precision Red Advanced Protein Assay
Protease inhibitor cocktail
Cell Lysis buffer
Antibody dilution buffer
Binding buffer*3
HRP stop solution
Sample dilution buffer
Strip holder for strip
Adhesive film for microplate

*3 キットにより内容は異なります。




種別 製品名 商品コード
A Arf1 G-LISA Activation Assay Kit BK132
Arf6 G-LISA Activation Assay Kit BK133
Rac1,2,3 G-LISA Activation Assay Kit BK125
Ral G-LISA Activation Assay Kit BK129
Ras G-LISA Activation Assay Kit BK131
RhoA G-LISA Activation Assay Kit BK124-S
BK124
B Cdc42 G-LISA Activation Assay Kit BK127-S
BK127
Rac1 G-LISA Activation Assay Kit BK128-S
BK128
C Rac1 G-LISA Activation Assay Kit BK126
RhoA G-LISA Activation Assay Kit BK121
D Total RhoA G-LISA Activation Assay Kit BK150

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資料ダウンロード

下の画像をクリックすると,それぞれの資料をダウンロードいただけます。

Small GTPase Activation Assayフライヤー

G-LISAフライヤー

CYO-glisa-technical-guide

G-LISA Activation Assay Technical Guide

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価格

[在庫・価格 :2020年06月06日 00時13分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
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  • 価格
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納期 文献数
Arf1 G-LISA Activation Assay Kit
1週間程度  1
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測定試料:ライセート,測定範囲:1-8 n (Rac1),検出方法:呈色,測定波長:490 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 well ※受注発注品
別包装品 別包装品あり
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アッセイ法:Assay,測定範囲:0.5-10 n (Cdc42),アッセイ数:96 well,検出方法:呈色,測定試料:ライセート,測定波長:490 nm ※受注発注品
別包装品 別包装品あり
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※受注発注品。測定試料:ライセート,測定範囲:10 pg-2 n (Rac1),検出方法:化学発光,測定波長:430~445 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 well
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アッセイ法:Assay,測定範囲:10 pg-1 n (Rac),アッセイ数:96 well,検出方法:呈色,測定試料:ライセート,測定波長:490 nm ※受注発注品
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1週間程度  1
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アッセイ法:Assay,測定範囲:50 pg-1 n (Ras),アッセイ数:96 well,検出方法:呈色,測定試料:ライセート,測定波長:490 nm
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[在庫・価格 :2020年06月06日 00時13分現在]

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Arf1 G-LISA Activation Assay Kit

文献数:1

  • 商品コード:BK132
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
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Arf6 G-LISA Activation Assay Kit

文献数:0

  • 商品コード:BK133
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

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Rac1 Activation Assay Kit, G-LISA, Colorimetric (24assays)

文献数:0

  • 商品コード:BK128-S
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥139,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

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Rac1 Activation Assay Kit, G-LISA, Colorimetric (96assays)

文献数:3

  • 商品コード:BK128
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
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説明文 測定試料:ライセート,測定範囲:1-8 n (Rac1),検出方法:呈色,測定波長:490 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 well ※受注発注品
別包装品 別包装品あり
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RalA G-LISA Activation Assay Kit

文献数:0

  • 商品コード:BK129
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

説明文 アッセイ法:Assay,測定範囲:0.5-5 n (Ral),アッセイ数:96 well,検出方法:呈色,測定試料:ライセート,測定波長:490 nm
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Cdc42 Activation Assay Biochem Kit, G-LISA, Colorimetric (24assays)

文献数:0

  • 商品コード:BK127-S
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥139,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

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文献数:4

  • 商品コード:BK127
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
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説明文 アッセイ法:Assay,測定範囲:0.5-10 n (Cdc42),アッセイ数:96 well,検出方法:呈色,測定試料:ライセート,測定波長:490 nm ※受注発注品
別包装品 別包装品あり
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Rac1 Activation Assay Biochem Kit, G-LISA, Luminescence (96assays)

文献数:0

  • 商品コード:BK126
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

説明文 ※受注発注品。測定試料:ライセート,測定範囲:10 pg-2 n (Rac1),検出方法:化学発光,測定波長:430~445 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 well
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文献数:3

  • 商品コード:BK125
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

説明文 アッセイ法:Assay,測定範囲:10 pg-1 n (Rac),アッセイ数:96 well,検出方法:呈色,測定試料:ライセート,測定波長:490 nm ※受注発注品
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Ras G-LISA Activation Assay Kit

文献数:1

  • 商品コード:BK131
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

説明文 アッセイ法:Assay,測定範囲:50 pg-1 n (Ras),アッセイ数:96 well,検出方法:呈色,測定試料:ライセート,測定波長:490 nm
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文献数:0

  • 商品コード:BK124-S
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥139,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
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別包装品 別包装品あり
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文献数:3

  • 商品コード:BK124
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

説明文 比色法による活性型Rho A測定キット。アッセイ法:Assay,測定範囲:0.05-2 n (RhoA),アッセイ数:96 well,検出方法:呈色,測定試料:ライセート,測定波長:490 nm
別包装品 別包装品あり
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Rho A Activation Assay Biochem Kit, G-LISA, Luminescence (96assays)

文献数:0

  • 商品コード:BK121
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥239,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
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説明文 化学発光法による活性型Rho A測定キット。アッセイ法:Assay,測定範囲:0.02-1.0 n (RhoA),アッセイ数:96 well,検出方法:化学発光,測定試料:ライセート,測定波長:430~445 nm
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RhoA/Rac1/Cdc42 Bundle Kit

RhoA,Rac1,Cdc42の3種類の比色定量キット(各24 assay分)をセットにした製品です。

[在庫・価格 :2020年06月06日 00時13分現在]

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納期 文献数
G-LISA Bundle Kit, RhoA/Cdc42/Rac1 (BK135=BK124-S+BK127-S+BK128-S)
1週間程度  0
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[在庫・価格 :2020年06月06日 00時13分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。

G-LISA Bundle Kit, RhoA/Cdc42/Rac1 (BK135=BK124-S+BK127-S+BK128-S)

文献数:0

  • 商品コード:BK135
  • メーカー:CYO
  • 包装:3kits
  • 価格:¥380,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

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法規制等
保存条件 4℃,乾燥状態(デシケータ内)で保存 法規備考
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製品記事 G-LISA RhoA/Rac1/Cdc42 Bundle Kit
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

Gタンパク質/環状ヌクレオチド