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マイクロアレイ用の aRNA 増幅キットを改良！ ExpressArt mRNA Amplification Kit, C&E Version

掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：3250

アルタス /
Amptec GmbH
[メーカー略称：ARU]

試料 RNA の鎖長を正しく反映した aRNA 増幅を行う ExpressArt シリーズが改良されて C&E（ Convenience & Efficiency）Version となり、より簡便かつ増幅効率が高くなりました。
また、oligo（dT）の代わりに特別にデザインされたプライマーを用いて、分解の進んだ mRNA（TR inucleotide Kit）やバクテリア mRNA（Bacterial Kit）から RNA を増幅するキットもあります。

※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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C&E Version はここが変わりました！！

  • より簡便（Convenience）に！
    エタノール沈殿が不要となり、1 回目の増幅に必要な操作数が 9 から 4 ステップに減りました。また、1 キット当たりの反応回数が 24 回から 30 回に増加しました。
  • より増幅効率が高く（Efficiency）！
    1 回目の増幅での RNA 増幅効率が最大 3 倍に、2 回目は最大 10 倍になり、合計での RNA 増幅効率は最大 30 倍となりました。
  • Amino allyl 標識 RNA の作製や、ビーズ固定 cDNA テンプレートの作製に必要な試薬は別売りのモジュールとなりました。
    従来は上記用途専用のキットが個別に発売されていましたが、キット本体とモジュールを組み合わせる方式に変更され、用途に応じた組み合わせが可能になりました。

■TRinucleotide mRNA Amplification Kit と通常のOligo（dT）プライマーを用いたリニア増幅法の比較

TRinucleotide mRNA Amplification Kit と通常のOligo（dT）プライマーを用いたリニア増幅法の比較

ほぼ無傷の RNA（RIN＝9.5）と分解の進んだ RNA（RIN＝2.2）をそれぞれの方法で増幅し、マイクロアレイ解析に用いた。通常の Oligo（dT）プライマーを使用した場合（左）は結果のずれが大きい（r＝0.793）が、TRinucleotide mRNA Amplification Kit（右）ではほとんど変わらない結果が得られた（r＝0.993）。

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特長

  • 本製品は、ExpressArt Kit は、1st strand cDNA を合成する際に T7 プロモーター配列を含まない oligo（dT）プライマーを、2nd strand cDNA を合成する際にはユニークな BOX-random-trinucleotide 配列から成る TRINUCLEOTIDE primer を使用しています。これにより Eberwine らが考案したリニア増幅法で見られる aRNA の鎖長が短くなる問題を解決しています。
  • mRNA を特異的に増幅できるため、rRNA を除去する必要がありません。また、バクテリア用キットでは真核生物の rRNA の除去も必要ありません。
  • 試料中の RNA 量をあらかじめ測定する必要がありません。
  • in vitro 転写反応のテンプレートにのみ T7 プロモーター配列を付加することにより、T7 プロモーター／oligo（dT）プライマーによるアーティファクトを抑えています。
  • TRINUCLEOTIDE primer を使用することによって 5' 末端を欠く RNA の増幅を軽減しています。
  • 両端にプライマー配列を付加した cDNA を合成するため、増幅回数を重ねても増幅 RNA の鎖長が短くなることはほとんどありません。
  • 試料 RNA がごく微量の場合は増幅した RNA をテンプレートにして cDNA を合成し、2 回または 3 回の増幅を行うことでアレイハイブリダイゼーションに十分な量の RNA を増幅できます。
  • TRinucleotide Kit は、分解の進んだ RNA や、ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）試料から精製した RNA からの増幅に適しています。また増幅した aRNA は、Exon Array、Gene Array（共に Affymetrix 社）などの全転写産物アレイでの使用に適しています。
  • 別売りのモジュールを組み合わせることで、Amino allyl 標識 RNA、ビーズ固定 cDNA テンプレートや、次世代シークエンスの使用に適した二本鎖 cDNA の作製ができます。

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お問い合わせ先

（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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