エキソン配列のみを選択的にクローニングするシステム Selective Cloning System Exontrap Kit
掲載日情報：2008/02/18 現在Webページ番号：2355
原核および真核細胞の複製用遺伝子を含むシャトルベクターpET01を用いて、真核細胞の大きなゲノムDNA断片からエキソン配列のみを選択的にクローニングするシステムです。
本キットを用いることで、発現時期が不明な遺伝子からもcDNAを得ることができます。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
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原理
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操作方法概略
- エクソンおよびイントロンを含むゲノムDNA断片をマルチクローニングサイト（MCS）に方向を揃えて挿入したプラスミドを構築し、大腸菌内で増幅する（方向が不明の場合は、挿入断片の方向が異なる2種類のプラスミドを構築する）。
- 市販のDNA精製キットにより本プラスミドを大量精製し、哺乳類細胞にトランスフェクションを行う（COS-7細胞など、SV40 large T Antigenを保持する細胞を推奨）。
- 哺乳類細胞内に導入されたプラスミドのプロモーターから目的断片を含む領域が転写され、細胞内でのスプライシングを経て、エクソンのみを含むmRNAが合成される。
- 本プラスミドが導入された細胞よりRNA抽出を行い、キットに付属するcDNA primer 01を用いて逆転写PCRによりcDNAを合成する。
- cDNAを鋳型とし、キットに付属のPCR primer 02（5’ PCR-primer）、PCR primer 03（3‘ PCR-primer）を用いてPCRによりcDNAを増幅する。
- 制限酵素BamHⅠおよびSmaⅠにより増幅断片を切断し、別の大腸菌用プラスミドベクターにクローニングを行う（BamHⅠ、SmaⅠが使用できない場合、Klenow Fragmentにより末端を平滑化し、平滑末端のベクターにクローニングを行う）。
- シークエンシングにより、挿入された配列を確認する。
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参考文献
- Liu, P., et al., Science, 246, 813 (1989).
- Corbo, L., et al., Science, 249, 652 (1990).
- Duyk, G.M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 8995 (1990).
- Auch, D. and Ruth, M., Nucl. Acids Res., 18, 6743 (1991).
- Buckler, A.J., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 4005 (1991).
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キット内容
- Exontrap vector
- cDNA primer
- PCR primers
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月25日 00時00分現在]
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Exontrap Vector |
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[在庫・価格 ：2024年04月25日 00時00分現在]
Exontrap Kit
文献数： 0
- 商品コード：K2010
- メーカー：MOB
- 包装：1kit
- 価格：¥214,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：3～4週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
原核および真核細胞の複製用遺伝子を含むシャトルベクターpET01を用いて,真核細胞の大きなゲノムDNA断片からエキソン配列のみを特異的にクローニングするシステム。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | |||
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Exontrap Vector
文献数： 0
- 商品コード：PET01
- メーカー：MOB
- 包装：5μg
- 価格：¥96,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：3～4週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
原核および真核細胞の複製用遺伝子を含むシャトルベクターpET01。真核細胞の大きなゲノムDNA断片からエキソン配列のみを選択的にクローニングできる。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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