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メーカー：	Horizon社Dharmacon製品 OriGene Technologies
	Horizon社Dharmacon製品(メーカー略称：DHA)のRNAiコレクション，cDNAコレクション，Yeastコレクションなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら OriGene Technologies社(メーカー略称：ORI)のTrueClone / TrueORF / TrueORF Gold cDNAクローンなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら
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HOME > 試薬 > 遺伝子工学 > PCR・シークエンシング > PCRクローニング > Selective Cloning System Exontrap Kit

エキソン配列のみを選択的にクローニングするシステム Selective Cloning System Exontrap Kit

掲載日情報：2008/02/18 現在Webページ番号：2355

原核および真核細胞の複製用遺伝子を含むシャトルベクターpET01を用いて、真核細胞の大きなゲノムDNA断片からエキソン配列のみを選択的にクローニングするシステムです。
本キットを用いることで、発現時期が不明な遺伝子からもcDNAを得ることができます。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

原理
操作方法概略
参考文献
キット内容
価格

原理

pET01には、ラットのプレプロインスリン遺伝子の二つのエキソンと、その間に挟まれた600 bpのイントロン配列があります。このイントロン配列中に、マルチクローニング部位を有するポリリンカーが存在し、目的DNAを挿入できます。クローン化したDNA断片に正しい方向でエキソンが含まれていれば、RNAが転写され、転写されたRNAからはスプライシングによりイントロン配列が除かれ、成熟したRNAが合成されます。3'-エキソンに特異的なプライマーを用いて逆転写反応を行い、得られたエキソン配列をPCRで増幅できます。
※ Exontrapシステムでは、5'-および3'-の両側にスプライス部位を有するエキソンのみがクローン化されます。したがって、三つ以上のエキソンを有する遺伝子の中央配列のみの同定と、クローニングができます。片側にのみスプライス部位のある1番目のエキソンおよび、最終エキソンはトラップされません。またベクターに挿入するために用いる制限酵素部位がエキソン内にあると、そのエキソンはトラップされません。

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操作方法概略

ExonTrap画像説明

エクソンおよびイントロンを含むゲノムDNA断片をマルチクローニングサイト（MCS）に方向を揃えて挿入したプラスミドを構築し、大腸菌内で増幅する（方向が不明の場合は、挿入断片の方向が異なる2種類のプラスミドを構築する）。
市販のDNA精製キットにより本プラスミドを大量精製し、哺乳類細胞にトランスフェクションを行う（COS-7細胞など、SV40 large T Antigenを保持する細胞を推奨）。

ExonTrap操作方法概略1