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酵母ノックアウトクローン Yeast Tet - Promoters Hughes Strain Collection(yTHC)

掲載日情報:2019/10/25 現在Webページ番号:2155

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酵母ノックアウトクローンライブラリ、Yeast Tet - Promoters Hughes Collection(yTHC)です。

本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
Dharmacon製品(メーカー略称:DHA)につきまして、2023年4月1日より製品ご注文時にHandling Fee(手数料)を本体価格とは別にご請求させていただきます。詳細は「Handling Feeについてのご案内」をご確認下さい。



製品概要

ゲノム全体に渡るノックアウト酵母の構築により、1,000 種類を超えるタンパク質をコードする遺伝子が酵母の生育に必須であることが明らかになりました。しかし、これらの必須遺伝子の多くは、ほとんど機能が解明されていません。その理由は、必須遺伝子であるために機能の分析が難しいことにあります。この困難を克服するために、University of Toronto のHughes 氏により、約800 種類の酵母クローンを含むYeast Tet - Promoters Hughes Collection(yTHC)が構築されました。

  • 各酵母クローンの必須遺伝子には、発現を抑制可能な変異が導入されています。必須遺伝子のプロモーターがTet - titratable プロモーターに置換されているため、ドキシサイクリンの添加により発現を抑制できます。
  • yTHC の酵母クローンは、1 倍体でa 型のR1158 株1(遺伝子型:URA3::CMV - tTA MATa his3 - 1 leu2 - 0 met15 - 0)より構築されました。
  • kanR - tetO7 - TATA カセットを持ったプラスミドをゲノムに挿入し、内在性のプロモーターをTet - titratable プロモーターに置換しています。プラスミドが正しく挿入されたことをPCR により確認した後、各酵母クローンはドキシサイクリンを10 μg / ml 含むYPD 培地で生育が制限されるかを確認しています**
  • ドキシサイクリンを含まない培地ではTet - titratable プロモーターが活性化され、ドキシサイクリンの添加により、目的遺伝子の発現が抑制されます。各酵母クローンの最適培養条件は、実験により決定する必要があります。

** 10 μg / ml のドキシサイクリン存在下で生育が抑制されない酵母クローンもあります。目的の実験に使用される前に、必ずHorizon Discovery社のWebサイトのデータファイルで確認を行って下さい。



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参考文献

  1. Hughes et. al., Cell, 7;102(1), 109 〜 126(2000)
  2. Winzeler, E. A., et. al.,“Functional characterization of the Saccharomyces cerevisiae genome by gene deletion and parallel analysis”, Science, 285, 901 〜 906(1999)

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Yeast Tet-promoters Hughes Collection (yTHC) (glycerol stock)
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Yeast Tet-promoters Hughes Parental Strain R1158 (glycerol stock)

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