Abnova 社推奨標準プロトコル 蛍光抗体免疫染色標準プロトコル[参考資料]

• スライドの調製
• 染色方法

スライドの調製

1. 滅菌した glass cover slip 上で、37 ℃で細胞を 1 晩培養します。
2. PBS で２回洗浄します。
3. 2 ml の 4% パラホルムアルデヒド溶液（NaOH 調製PBS, pH7.4）で 15 分間細胞を固定します。

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染色方法

1. 氷上で 2 ml の 0.1% Triton X-100 を含む PBS に 15 分間浸します。
2. PBS で３回洗浄します。
3. 5 ％正常ヤギ血清 PBS 溶液を滴下し 1 時間インキュベートします。
4. 希釈した一次抗体を滴下します。
5. 室温で 4 時間あるいは 4 ℃で 1 晩インキュベートします。
6. PBS で 5 分間洗浄を 5 回繰り返します。
7. glass cover slip を遮光保湿チャンバー中で、5％正常ヤギ血清入り蛍光標識二次抗体 PBS 溶液と 4 ℃で 1 時間インキュベートします。
8. PBS で 5 分間洗浄を 6 回繰り返します。
9. DAPI で対比染色します（室温、30 分間）。
10. PBS で 2 分間洗浄を 3 回繰り返します。
11. スライドグラスに封入剤を滴下し、glass cover slip を反転してその上に被せます。
12. スライドは 4 ℃で暗所に保存します。

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