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AMPK/ERK/NFκBのリン酸化を細胞ベースELISA法で測定するキット EnzyFluoリン酸化タンパク質測定キットシリーズ

掲載日情報:2020/12/10 現在Webページ番号:7448

96ウェルプレートで培養した細胞上で、リン酸化AMPK、ERKまたはNFκBを蛍光法により測定するキットです。キットに含まれる総タンパク質量の検出用試薬により相対値が得られます。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

測定例

EnzyFluo AMPK Phosphorylation Assay Kit(#EAMPK-100)

AMPK測定例1

MetforminによるPANC-1細胞中のpAMPKの経時変化


AMPK測定例2

PANC-1細胞におけるMetformin3時間処理後のpAMPK用量反応曲線

Metformin未処理PANC-1細胞におけるpAMPKを100%として算出した。

EnzyFluo ERK Phosphorylation Assay Kit(#EERK-100)

ERK測定例1

Phorbol myristate(PMA)処理PANC-1細胞におけるERK1/2のリン酸化のカイネティック反応曲線




ERK測定例2

キナーゼインヒビターSorafenibによるERK1/2リン酸化の阻害曲線

RBL-2H3細胞、NIH 3T3細胞、およびAPNC-1細胞をSorafenibで3時間処理し、次に5分間にPMAで処理した。それぞれのIC50は、2.1、11.4、11.5であった。

EnzyFluo NFκB Phosphorylation Assay Kit(#ENFKB-100)

ENGKB測定例1

ヒト乳がん細胞株MDAMB-におけるNFκBp65(S536)のリン酸化

ヒトTNF-αによる刺激後の231細胞およびマウスNIH-3T3線維芽細胞

ENFKB測定例2

TNF-α刺激後のMDA-MB-231細胞におけるNFκBp65(S536)リン酸化の動態



キット品バナー

BioAssay Systems社 アッセイキット Metabolism Research Kitシリーズ Obesity Diabete Research Kits
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特長

  • 操作は簡便で、細胞の溶解は必要ありません。
  • アッセイの改良により、測定時間は従来の9時間から5時間へと短縮されています。
  • 細胞は96 wellプレート内で直接培養することができます。
  • 標的のリン酸化タンパク質と、総タンパク質を同じ試料を異なる測定波長で測定することで、相対値が得られます。
  • 測定動物種:AMPKERK Kit:ヒト、マウス、ラット、NFκB Kit:ヒト、マウス
  • 測定試料:全組織由来の培養細胞
  • フォーマット:96 well plate
  • 測定原理:細胞ベースELISA
  • 測定方法:蛍光
  • 測定波長:リン酸化タンパク質:励起 530 nm/蛍光 585 nm、総タンパク質:励起 360 nm/蛍光 450 nm

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製品の種類

品名をクリックすると製品の詳細、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 EnzyFluo Phosphorylation Assay Kit
AMPK ERK NFκB
商品コード EAMPK-100 EERK-100 ENFKB-100
キット内容 Stock wash buffer
Blocking buffer
Protein stain
HRP substrate
Ab1*
Ab2(gR-HRP)*

キットにより内容は異なります。
測定には蛍光プレートリーダー、および黒色平底96 wellマイクロプレートが必要です。



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EnzyFluo AMPK Phosphorylation Assay Kit(#EAMPK-100)

AMPKとは

5-AMP活性化プロテインキナーゼ(AMPK, 5-AMP-activated protein kinase)は、細胞内エネルギーバランスの重要なセンサーです。AMPKは、筋肉の収縮、飢餓、低酸素症などの多くの要因によって起こり得るAMP/ATP比の増加に応答して活性化されます。AMPKは、α-(63 kDa)、β-(38 kDa)、およびγ-(38 kDa)サブユニットで構成されるヘテロ三量体タンパク質複合体です。各サブユニットについて、理論的に形成可能な12種類の異なるタンパク質のアイソフォーム(α1、α2、β1、β2、γ1、γ2、γ3)が特定されています。αサブユニットにはセリン/スレオニンキナーゼドメインが含まれ、調節サブユニットにはAMPとATP(γサブユニット)およびグリコーゲン(βサブユニット)の結合部位が含まれます。

AMPKは、触媒ドメイン内のThr-172(スレオニン172)のリン酸化によって活性化されます。AMPの結合により、基準値と比較してAMPK活性が2~5倍に増加します。AMPのγサブユニットへの結合は、キナーゼのアロステリック活性化を引き起こし、Thr-172の脱リン酸化からAMPKを保護するキナーゼドメインの構造変化を誘発します。


測定原理

リン酸化AMPK測定原理

AMPK細胞ベースELISAの測定原理

  • A. 96 wellプレート内で培養した細胞し、被験物質のリガンドまたは薬物処理後にホルムアルデヒド(キットに含まれない)溶液で細胞の固定化処理を行う。
  • B. Rabbit anti-pAMPK抗体を添加する。
  • C. Anti-rabbit IgG-HRP抗体を添加する。
  • D. 蛍光基質を加え、リン酸化AMPK(pAMPK)(Ex 530 nm/Em 585 nm)、次に総タンパク質(Ex 360 nm/Em 450 nm)を測定する。

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EnzyFluo ERK Phosphorylation Assay Kit(#EERK-100)

ERKとは

マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ (MAPK、Mitogen-activated Protein Kinase/ERK、Extracellular Signal-regulated Kinase)経路は、細胞の増殖、分化、遊走において重要な役割を果たしています。マイトジェンによる刺激は、最終的にERK1(T202/Y204)およびERK2(T185/Y187)のリン酸化を引き起こします。MAPK/ERKカスケードには、がん治療法開発のための数多くの興味深い創薬ターゲットが存在しています。


測定原理

リン酸化ERK測定原理

ERK細胞ベースELISAの測定原理

  • A. 96 wellプレート内で培養した細胞し、被験物質のリガンドまたは薬物処理後にホルムアルデヒド(キットに含まれない)溶液で細胞の固定化処理を行う。
  • B. Mouse anti-pERK一次抗体を添加する。
  • C. Anti-mouse IgG-HRP抗体を添加する。
  • D. 蛍光基質を加え、リン酸化ERK(pERK)(Ex 530 nm/Em 585 nm)、次に総タンパク質(Ex 360 nm/Em 450 nm)を測定する。

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EnzyFluo NFκB Phosphorylation Assay Kit(#ENFKB-100)

NFκBとは

Nuclear factor-kappa B(NFκB)は、炎症、腫瘍形成、およびアポトーシスなどの多くの生理学的プロセスで中心的な役割を果たす転写因子です。NFκBは、TNF-αなどの炎症性サイトカインを含む様々な刺激によって活性化されます。NFκBは、Relファミリーのタンパク質のメンバーで構成される二量体(p65/RelA、c-Rel、Rel-B、NFκB1/p50、およびNFκB2/p52)です。Ser-536におけるp65/RelAのリン酸化は、核外輸送の減少とp65/RelA依存性転写の増強をもたらします。



測定原理

リン酸化NFκK測定原理

NFκB細胞ベースELISAの測定原理

  • A. 96 wellプレート内で培養した細胞し、被験物質のリガンドまたは薬物処理後にホルムアルデヒド(キットに含まれない)溶液で細胞の固定化処理を行う。
  • B. Rabbit anti-pNFκB p65 (S536)抗体を添加する。
  • C. Anti-rabbit IgG-HRP抗体を添加する。
  • D. 蛍光基質を加え、リン酸化NFκB(pNFκB)(Ex 530 nm/Em 585 nm)、次に総タンパク質(Ex 360 nm/Em 450 nm)を測定する。

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価格

EnzyFluo AMPK Phosphorylation Assay Kit

[在庫・価格 :2024年04月28日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
AMPK Phosphorylation Assay Kit, EnzyFluo(100tests)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 3
説明文
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年7月15日号 p.7
ニュース2020年6月1日号 p.5

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[在庫・価格 :2024年04月28日 00時00分現在]

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AMPK Phosphorylation Assay Kit, EnzyFluo(100tests)

文献数: 3

説明文
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年7月15日号 p.7
ニュース2020年6月1日号 p.5

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EnzyFluo ERK Phosphorylation Assay Kit

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詳細 商品名
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納期 文献数
ERK Phosphorylation Assay Kit, EnzyFluo (100tests)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
種交差性:Human/Mouse/Rat,測定試料:細胞,検出方法:蛍光,測定波長:530/585, 360/450 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:100 tests
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ

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ERK Phosphorylation Assay Kit, EnzyFluo (100tests)

文献数: 0

説明文 種交差性:Human/Mouse/Rat,測定試料:細胞,検出方法:蛍光,測定波長:530/585, 360/450 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:100 tests
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 -20℃ 法規備考
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[在庫・価格 :2024年04月28日 00時00分現在]

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詳細 商品名
  • 商品コード
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納期 文献数
NFkB Phosphorylation Assay Kit, EnzyFluo(100tests)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 1
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法規制等 医薬用外劇物
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[在庫・価格 :2024年04月28日 00時00分現在]

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NFkB Phosphorylation Assay Kit, EnzyFluo(100tests)

文献数: 1

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法規制等 医薬用外劇物
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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