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ショウジョウバエや細菌のセカンドメッセンジャーである3'2'-cGAMPを高感度で定量！ 3'2'-cGAMP ELISA Kit（Cayman Chemical社）

掲載日情報：2024/05/08 現在Webページ番号：71301

ケイマン ケミカル /
Cayman Chemical Company
[メーカー略称：CAY]

試料中の3'2'-cyclic GAMP（3'2'-cGAMP、3',5'-2',5'-cGAMP）量を、競合法で比色定量するELISAキットです。従来のLC-MS/MS法に代わる高感度、高特異性、簡便な操作かつコストパフォーマンスに優れた測定キットです。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


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3'2'-cGAMPとは

cGAMP（cyclic GMP-AMP）のアイソマーの1つである、3'2'-cGAMP（3'2'-cGAMP、3',5'-2',5'-cGAMP）は、ショウジョウバエや細菌に存在する環状ジヌクレオチド（Cyclic dinucleotide、CDN）で、ウイルス感染に関わる自然免疫系においてセカンドメッセンジャーとして機能します。


cGASを介した2'3'-cGAMPの産?や自然免疫

図1. 哺乳類およびショウジョウバエにおけるウイルス感染時の抗ウイルス作用発現の模式図

図1 左：哺乳類の細胞にDNAウイルスが感染すると、細胞内に侵入したウイルス由来DNAが、サイクリックGMP-AMP合成酵素（cyclic GMP-AMP synthase、cGAS）に検知され、ATPとGTPからセカンドメッセンジャーである2'3'-cGAMPが合成されます。合成された2'3'-cGAMPはインターフェロン遺伝子刺激因子（Stimulator of interferon gene、STING）を活性化し、自然免疫応答を引き起こします。

図1 右：ショウジョウバエでは、RNAおよびDNAウイルスの感染に応答して、2'3'-cGAMPだけではなく3'2'-cGAMPも合成されます。 この3'2'-cGAMPの合成は、外来二本鎖RNAによって活性化される自然免疫センサーcGAS様受容体1（cGLR1）およびリガンドが不明ですが、2'3'-cGAMP産生にも関与するcGLR2によって行われます。 3'2'-cGAMPは、ショウジョウバエのSTING（dSTING）に結合し、Stingおよびその下流の何種類かのSting制御遺伝子（Sting-regulated genes、Srg）の発現を誘導しますが、これはdSTINGとNF-κBのショウジョウバエホモログであるRelishに依存した系です1。RNAウイルスであるショウジョウバエCウイルス（Drosophila C virus、DCV）に感染したハエでは、3'2'-cGAMPがウイルス量を減少させ、その生存率を高めます1。さらに、cGLR1とcGLR2は、DCVまたはDNAウイルスであるKallithea virusに感染したハエにおいて、その生存に必須であることが報告されています2。

細菌では、3'2'-cGAMPは、ある種の環状オリゴヌクレオチドに基づく抗ファージシグナル伝達系（cyclic oligonucleotide-based anti-phage signaling system、CBASS）におけるセカンドメッセンジャーとして機能します3。Asticcacaulis sp.由来のcGAS/DncV様ヌクレオチジルトランスフェラーゼ（CD-NTase、CdnG）であるAsCdnGは、3'2'-cGAMPを合成し、これがCBASSエフェクタータンパク質AsCap5を活性化させてDNAを分解します。

参考文献

  1. Slavik, K.M., et al., "cGAS-like receptors sense RNA and control 3'2'-cGAMP signalling in Drosophila.", Nature, 597(7874), 109～113 (2021). [PMID: 34261127]
  2. Holleufer, A., et al., "Two cGAS-like receptors induce antiviral immunity in Drosophila.", Nature, 597(7874), 114～118 (2021). [PMID: 34261128]
  3. Fatma, S., et al., "Molecular mechanisms of the CdnG-Cap5 antiphage defense system employing 3',2'-cGAMP as the second messenger.", Nat. Commun. 12(1), 6381 (2021). [PMID: 34737303]


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特長

  • フォーマット：マイクロプレート（96 well）
  • 測定試料数：24種（n=3の場合）、36種（n=2の場合）
  • 測定動物種および試料：ショウジョウバエ（Drosophila）のホモジネート、細菌ライセート
  • 測定法：競合ELISA法
  • 測定範囲：7.8 ～ 1,000 pM （5.3 ～ 674.4 pg/ml）
  • Mid-point（50% B/B0）：72 pM（48.6 pg/ml）
  • 測定感度（80% B/B0）：15 pM（10.1 pg/ml）
  • 検出限界（LLOD）：4.0 pM（2.7 pg/ml）
  • 測定時間：3時間
  • 測定波長：450 nm
  • 検出方法：比色法

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測定原理

試料（またはスタンダード）中の遊離3'2'-cGAMPと、キットに含まれるHRP標識3'2'-cGAMP（3'2'-cGAMP-HRPトレーサー）が競合して、抗3'2'-cGAMPポリクローナル抗体に結合します。吸光度はウェルに結合したHRP標識3'2'-cGAMPの量に比例するため、試料中の3'2'-cGAMPの濃度に反比例します。

ELISAの概要

図2. 競合法による3'2'-cyclic GAMP ELISA Kitの測定原理の概略図


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交差性

物質名 交差性
3'2'-cGAMP 100%
2'2'-cGAMP 0.27%
3'3'-cGAMP 0.0009％
2'3'-cGAMP 0.0006％
pApG 0.0004％
cyclic di-GMP 0.0001％
ATP ＜0.0001%
GTP ＜0.0001%
AMP ＜0.0001%
GMP ＜0.0001%
cAMP ＜0.0001%
cGMP ＜0.0001%
cyclic di-AMP ＜0.0001%


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使用例

Multiplex ELISA Kitのイメージ

図3. 本キットの検量線の一例

平行性の検討のグラフ


図4. 平行性（Parallelism）の評価

ショウジョウバエのホモジネート（■）、Ds-cGLR1を導入したE. coliのライセート（▲）および標準物質（●）を、本キットを用いて評価した。縦軸に3'2'-cGAMPの濃度を、横軸には試料の希釈率をプロットした。


ショウジョウバエのホモジネートを用いた添加回収試験

図5. 添加回収試験1

ショウジョウバエのホモジネートに、図中に記載の量の3'2'-cGAMPを添加し、本キットを用いて評価した。エラーバーは各試料の複数希釈から得られた標準偏差を表す。

形質転換E. coliライセートを用いた添加回収試験

図6. 添加回収試験2

Ds-cGLR1を導入したE. coliのライセートに、図中に記載の量のの3'2'-cGAMPを添加し、本キットを用いて評価した。エラーバーは各試料の複数希釈から得られた標準偏差を表す。


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関連製品：環状ジヌクレオチド測定キット

※ 製品名をクリックすると、各製品の記事をご覧いただけます。
製品名 製品概要
2'3'-cGAMP(cyclic GMP-AMP) ELISA Kit 試料中の2'3'-cGAMPを競合法により比色定量するELISAキットです。生物学的環境における2'3'-cGAMP形成・分解動態のモニタリング、およびcGAS活性の調節物質スクリーニングに有用です。
3'3'-cGAMP ELISA Kit 試料中の3'3'-cyclic GMP-AMP（3'3'-cGAMP）を、競合法により比色定量するELISAキットです。 高感度かつ特異的であり、またLC-MS/MSで検証されているため、正確で信頼性の高い結果が得られます。
Cyclic di-AMP/Cyclic di-GMP ELISA Kit 細菌の細胞ライセート中のCyclic di-AMP、またはCyclic di-GMPを競合法により比色定量するELISAキットです。


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キット内容

  • 3'2'-cGAMP ELISA polyclonal antiserum
  • 3'2'-cGAMP-HRP tracer
  • 3'2'-cGAMP ELISA standard
  • Immunoassay buffer C concentrate
  • Wash buffer concentrate
  • Polysorbate 20
  • Mouse anti-rabbit IgG-coated plate
  • TMB substrate solution
  • HRP stop solution
  • ELISA tracer dye
  • ELISA antiserum dye
  • 96-well cover sheet

※ 別途、450 nmで測定できるプレートリーダー、オービタルシェーカーなどが必要です。

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価格

[在庫・価格 ：2024年05月20日 00時00分現在]

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 納期 文献数
3'2'-cGAMP ELISA Kit (Solid Plate)
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説明文
※Solid Plateは96ウェルプレートが一体型のタイプです。 ショウジョウバエや細菌のセカンドメッセンジャーである3'2'-cGAMPを競合法で比色定量するELISAキット。
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3'2'-cGAMP ELISA Kit (Strip Plate)
 2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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※Strip Plateは96ウェルプレートが分割可能なストリップタイプです。 ショウジョウバエや細菌のセカンドメッセンジャーである3'2'-cGAMPを競合法で比色定量するELISAキット。
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3'2'-cGAMP ELISA Kit (Solid Plate)

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説明文 ※Solid Plateは96ウェルプレートが一体型のタイプです。 ショウジョウバエや細菌のセカンドメッセンジャーである3'2'-cGAMPを競合法で比色定量するELISAキット。
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3'2'-cGAMP ELISA Kit (Strip Plate)

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説明文 ※Strip Plateは96ウェルプレートが分割可能なストリップタイプです。 ショウジョウバエや細菌のセカンドメッセンジャーである3'2'-cGAMPを競合法で比色定量するELISAキット。
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お問い合わせ先

（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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Gタンパク質／環状ヌクレオチド