遊離亜鉛イオン（Mobile Zinc）応答性タンパク質ラベル化試薬
Zin-Pro Capture
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：80823
フナコシ /
フナコシ株式会社
[メーカー略称：FNA]
Zin-Pro Captureは遊離亜鉛イオン（Mobile Zinc）に応答し、周辺に存在するタンパク質にフルオレセイン標識するコンディショナルプロテオミクス試薬です。細胞内遊離亜鉛イオンの輸送動態に関わるタンパク質の同定・解析に有用な試薬です。
※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。 Zin-Pro Captureのアプリケーション例
※本製品はフナコシ（株）が☞ 京都大学工学研究科 浜地教授の研究成果に基づき製品化したものです。
アプリケーションの項目をクリックすると、それぞれの使用例をご覧いただけます。
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- コンディショナルプロテオミクス（Conditional proteomics）とは
- Zin-Pro Captureとは
- 特長
- アプリケーションデータ
- 亜鉛イオン解析の重要性についてのFAQ
- 使用文献
- 価格
コンディショナルプロテオミクス（Conditional proteomics）とは
タンパク質標識試薬は細胞に添加することで内在性タンパク質への標識が可能です。蛍光色素導入によるタンパク質可視化や機能性分子の導入による機能付加などさまざまな用途に用いられています。また、網羅的プロテオミクスにも有用なツールとして用いられています。しかしながら、生体内の夾雑な環境で標識する場合、標識したいターゲットタンパク質を選ぶことは難しく、また必要なタイミングで標識することは難しいことが課題です。
京都大学 浜地教授らは必要なタイミングでタンパク質に標識を導入できる環境依存性タンパク質標識技術を確立しました。この環境依存的（condition dependent）なタンパク質標識を利用したプロテオミクスはコンディショナルプロテオミクス（Conditional proteomics）として2016年のNature Methods誌に提案され、注目されています。
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Zin-Pro Captureとは
Zin-Pro Captureのタンパク質標識の原理
Zin-Pro Captureによる細胞内のタンパク質標識の様子
図をクリックすると拡大します（
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Zin-Pro Captureによる細胞内のタンパク質標識の様子
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特長
- 亜鉛イオンに対する高い特異性があります。細胞内の主要な金属イオンであるMn2+, Fe2+, Fe3+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+では反応性を示しません。
- 遊離亜鉛イオンの有無で高いSN比を示します。亜鉛イオン存在下では迅速にタンパク質にフルオレセインを標識します。
- Zin-Pro Captureは細胞膜透過性があるため、培地に添加するだけで自発的に細胞に取り込まれます。
- Zin-Pro Captureにより標識されたタンパク質は抗フルオレセイン抗体を用いた免疫沈降法で精製が可能です。
- Zin-Pro Captureにより標識されたタンパク質は細胞固定後に免疫染色に利用することができ、局在観察が可能です。
- 推奨使用濃度1 μMでは細胞毒性がほとんどありません。
- さまざまなアプリケーションに使用可能です（☞ 下記参照）。
- 分子式：C46H40N6O11
- 分子量：852.85 g/mol
- 溶解性：DMSO
- Ex/Em：495/515 nm （一般的なFITC用フィルターが使用できます）
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アプリケーションデータ
アプリケーション①：標識総タンパク質の解析
アプリケーション②：標識タンパク質のウエスタンブロット及び質量分析での解析
C6グリオーマ細胞に酸化ストレス処理（一酸化窒素発生試薬SNOC, 200 uM）をした0、10、180分後にZin-Pro Captureでラベル化されたタンパク質を抗フルオレセイン抗体（anti-FL）で免疫沈降し精製した後、ウエスタンブロット（A）と質量分析（B）で解析した。
A：ウエスタンブロット法による個々のタンパク質の解析
B：質量分析による網羅的な解析
TMT法により安定同位体を酸化ストレス0、10、180分処理サンプルにそれぞれ標識し、Zin-Pro Captureでの標識後、免疫沈降で回収、電気泳動、トリプシン消化しLC-MS/MSで0分/10分、10分/180分後の組み合わせで比較解析をおこなった。TMT法を用いることで、2サンプル間の変動を網羅的に解析できた。
アプリケーション③：標識タンパク質の細胞内局在観察
Zin-Pro Captureで標識したタンパク質の局在を固定細胞で可視化できる。免疫染色に利用することも可能で、各種オルガネラマーカーとの共染色や、遊離亜鉛イオンの輸送に関わるタンパク質との関係を時空間的に観察できる。
細胞をメタノールで固定し、フルオレセインの蛍光シグナルを共焦点顕微鏡で観察した。
酸化ストレス処理10分後は細胞全体に標識が見られるが、2時間後はベシクル状の染色像が観察され、遊離亜鉛が毒性を抑えるためにベシクルに輸送されたことがわかる。
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亜鉛イオン解析の重要性についてのFAQ
Q-1. 何故亜鉛イオンの挙動を解析する必要があるの？
A-1.
Q-2. 亜鉛イオンのイメージングではだめなの？
A-2. 遊離亜鉛イオンの各種イメージング試薬は細胞内の亜鉛の局在を観察するのに優れたツールとして用いられていますが、亜鉛イオンが局在する細胞内構造は不均一で複数のオルガネラにまたがっていることがわかっています。そのため、遊離亜鉛イオンの可視化には便利ですが、イメージングだけでは遊離亜鉛の輸送経路を正確に理解するのは不十分とされています。Zin-Pro Captureは亜鉛が濃縮する細胞内画分のタンパク質に選択的にフルオレセイン標識できるため、亜鉛が輸送される軌跡をタンパク質分子レベルで解析可能です。
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使用文献
- Miki, T., et al., " A conditional proteomics approach to identify proteins involved in zinc homeostasis.", Nat. Methods, 13(11), 931～937 (2016). [PMID：27617391]
この論文では、Zin-Pro Capture（☞ AIZin-2）を使用したコンディショナルプロテオミクスにより脳内虚血のモデルとして知られる酸化ストレス条件下におけるグリオーマ細胞内の亜鉛イオンの輸送経路をタンパク質レベルで解明しました。酸化ストレスによってメタロチオネインから放出された遊離亜鉛イオンの毒性を抑えるため、細胞が亜鉛イオンをCOPⅠ/COPⅡ小胞およびER-Golgi 中間分画（ER-Golgi intermediate compartment; ERGIC）に封じ込めることを世界で初めて分子レベルで明らかにしています。
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月24日 00時00分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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Zin-Pro Capture <Mobile Zinc-Responsive Protein Labeling Reagent> |
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Zin-Pro Capture <Mobile Zinc-Responsive Protein Labeling Reagent> |
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[在庫・価格 ：2024年04月24日 00時00分現在]
Zin-Pro Capture <Mobile Zinc-Responsive Protein Labeling Reagent>
文献数： 0
- 商品コード：FDV-0013A
- メーカー：FNA
- 包装：25μg
- 価格：¥40,000
- 在庫：3個以上
- 納期：1週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
遊離亜鉛イオン（Mobile Zinc）に応答し，周辺に存在するタンパク質をフルオレセイン標識するコンディショナルプロテオミクス試薬（文献中の名称：AIZin-2）。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年3月15日号 p.6 ニュース2017年10月15日号 p.19
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
Zin-Pro Capture <Mobile Zinc-Responsive Protein Labeling Reagent>
文献数： 0
- 商品コード：FDV-0013B
- メーカー：FNA
- 包装：3x25μg
- 価格：¥100,000
- 在庫：3個以上
- 納期：1週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
遊離亜鉛イオン（Mobile Zinc）に応答し，周辺に存在するタンパク質をフルオレセイン標識するコンディショナルプロテオミクス試薬（文献中の名称：AIZin-2）。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年3月15日号 p.6 ニュース2017年10月15日号 p.19
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