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アデノウイルスベクター構築システム AdenoQuick Cloning System

掲載日情報:2016/08/17 現在Webページ番号:6058

E. coli 内での相同組換えを必要とせず、制限酵素を使用したdirectional cloningにより、迅速にアデノウイルスベクターが構築できるシステムです。コスミドを用いることにより、完全長のアデノウイルスゲノムDNAをクローニングできます。
E1置換型アデノウイルスベクター、E1置換/E4欠失型アデノウイルスベクターがあり、さらにE3領域を欠失させ、よりサイズの大きな遺伝子の導入を可能にしたベクターもあります。また、2種類の目的遺伝子を発現させることのできるアデノウイルスベクター(E1/E3置換型)があります。腫瘍選択的増殖型アデノウイルスベクター(CrAds)もあり、腫瘍細胞の研究に有用です。

操作法概略(E1置換型の場合)

操作法概略
  1. 薬剤選択マーカーを含むシャトルベクターのマルチクローニングサイトに、目的の発現カセットをサブクローニングします。
  2. これをAlwNIやBstAPI等の制限酵素を使用した定方向クローニングによりアデノウイルスプラスミドへ組み込みます。
  3. 得られたプラスミド/コスミドを線状化してヘルパー細胞に導入し、ウイルス粒子を作製します。

AdenoQuick Cloning Systemの特長

  • 目的遺伝子発現用のプロモーターを含まないシャトルベクターと、CMVプロモーターを含むシャトルベクターがあります。
  • キットには形質転換の際に必要な、λファージパッケージング用の試薬類が含まれています。
  • 従来、サイズの大きなアデノウイルスベクターのクローニングは手間がかかり困難とされてきましたが、AdenoQuickシステムでは薬剤耐性遺伝子(Kanamycin)による選択、およびコスミドのλcos部位を利用することにより、ほぼ100%の効率でポジティブクローンが得られます。
  • 本システムで使用しているアデノウイルスベクターは、ヒトアデノウイルス5型(Ad5)由来で、いずれもE1遺伝子が欠失しています。そのため作製した組換えアデノウイルスは通常の細胞では複製増殖することができず、E1遺伝子を発現しているHEK293細胞などでのみ増殖が可能です。
  • 相同組換えを必要としないため、予期せぬ組換えが起こるリスクを最小限にでき、recA+株(BJ5183など)を介して形質転換を行う必要がありません。形質転換はDH5α、XL-1 Blue、Top10などのrecAendA株に直接行えます。
  • 1 mlのE. coli 培養液から最大3μgのコスミドDNAが得られます。
  • 細胞へトランスフェクション後、およそ7~10日間(早い場合は4日間)で組換えウイルスが得られます。

本製品はご購入時に専用の「使用目的確約書」が必要となります。詳細については当社受託・特注品業務担当(Tel. 03-5684-1645、Fax 03-5684-6539)までお問い合わせ下さい。


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AdenoQuick Cloning Systemのキット製品

アデノウイルスプラスミドとシャトルベクター、コントロールDNA、λファージパッケージング用試薬を含むキットです。

各ベクターの詳細はこちらを御覧下さい。

O.D.260 Ins社ウェブサイト上で、アデノウイルスプラスミドとシャトルベクターを選択すると、キット製品の商品コードが表示されます。ぜひご利用下さい。

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AdenoQuick Cloning Systemの価格

[在庫・価格 :2024年04月26日 00時00分現在]

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AdenoQuick 1.0 Kit (pAd288+pE1.1) (10tests)
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説明文 。 キット内容:pE1.1, pAd329, Control Adβgal, λ packaging extract, 10% Maltose, 1M MgSO4, SM medium。
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シャトルベクター/アデノウイルスプラスミド

■シャトルベクター

pE1.2-CMV pE1-CMV
pE1.2-CMV(#QP-21)
E1/E3置換型アデノウイルスプラスミドのE1領域挿入用(CMVプロモーター付加型)
pE3-CMV(#QP-17)
E1/E3置換型または選択増殖型アデノウイルスプラスミドのE3領域挿入用(CMVプロモーター付加型)

■アデノウイルスプラスミド

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アデノウイルスベクターのラインナップ

アデノウイルスプラスミド
(商品コード)
使用するシャトルベクター
(商品コード)
アデノウイルスベクターの特長 挿入可能な遺伝子サイズ [kb] 各領域の状態
E1 E3 E4
AdenoQuick1.1
(#QR-01)
pE1.1
(#QP-01)
E1領域に目的遺伝子を挿入する。 5.0 ⊿3.1 kb WT WT
AdenoQuick1.2
(#QR-02)
pE1.1
(#QP-01)
E1領域に目的遺伝子を挿入する。E3領域も欠失させてあり、より大きなサイズの遺伝子導入が可能。 7.6 ⊿2.7 kb
AdenoQuick13.1
(#QR-03)
pE1.2またはpE1.2-CMV,
pE3.1またはpE3-CMV
(#QP-02または#QP-21,
#QP-03または#QP-17)
E1領域とE3領域それぞれに目的遺伝子を挿入し、2種類の遺伝子を発現できる。 7.4
pAd361
(#QR-04)
pE1.1
(#QP-01)
E1領域に目的遺伝子を挿入し、E4領域を欠失させたアデノウイルスベクター。 6.2 ⊿3.1 kb WT ⊿1.2 kb
pAd362
(#QR-05)
pE1.1
(#QP-01)
E1領域に目的遺伝子を挿入し、E4領域を欠失させたアデノウイルスベクター。E3領域も欠失させてあり、より大きなサイズの遺伝子導入が可能。 8.9 ⊿2.7 kb
pAd363
(#QR-06)
pE1.2またはpE1.2-CMV,
pE3.1またはpE3-CMV
(#QP-02または#QP-21,
#QP-03または#QP-17)
E4領域を欠失させたアデノウイルスベクター。E1領域とE3領域それぞれに目的遺伝子を挿入し、2種類の遺伝子を発現できる。 8.7
pAd329
(#OP-02)
pE1.1
(#QP-01)
E1a TATAボックスの上流にプロモーターを挿入し、腫瘍選択的増殖型アデノウイルスベクター(CrAd)を構築できる。 1.9 ⊿0.1 kb WT WT
pAd330
(#OP-03)
pE1.1
(#QP-01)
E1a TATAボックスの上流にプロモーターを挿入し、腫瘍選択的増殖型アデノウイルスベクター(CrAd)を構築できる。E3領域を欠失させてあり、より大きなサイズの遺伝子挿入が可能。 4.6 ⊿2.7 kb
pAd328
(#OP-01)
pE1.2またはpE2-CMV, pE3.1またはpE3-CMV
(#QP-02, #QP-21, #QP-03または#QP-17)
E1a TATAボックスの上流にプロモーターを挿入し、腫瘍選択的増殖型アデノウイルスベクター(CrAd)を構築できる。E3領域にも遺伝子挿入が可能。 4.4

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シャトルベクター/アデノウイルスプラスミドの価格

■シャトルベクター

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[在庫・価格 :2024年04月26日 00時00分現在]

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納期 文献数
Lambda packaging reagents (10 packaging)
ご照会下さい ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
※ウイルスベクター関連製品のため,購入時に使用者確認書が必要です。 キット内容:10% maltose, 1M MgSO4, SM medium, λ packaging extract。
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文献数: 0

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reagent@funakoshi.co.jp

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