糖転移酵素の活性測定キット Glycosyltransferase Activity Kit

• 特長
• 測定原理
• 操作法概略
• 測定実績
• 測定例
• キット内容
• 価格

特長

• 糖転移反応により生成する二リン酸化ヌクレオチドから、脱リン酸化酵素であるENTPD3 / CD39L3により無機リン酸を遊離させ、マラカイトグリーンで検出します。
• キットに含まれるPhosphate standard（KH₂PO₄）により標準曲線を作成できます。
• 96ウェルフォーマットのため、ハイスループット解析にも対応できます。
• ラジオアイソトープを使用しません。
• 測定波長：620 nm

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測定原理

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操作法概略

1. 96ウェルプレートに、反応溶液（donor substrate, acceptor substrate, phosphatase）を添加する。
2. Glycosyltransferaseを添加し、反応を開始する。
3. マラカイトグリーンで反応を停止し、マイクロプレートリーダーで620 nmの吸光度を測定する。

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測定実績

転移酵素	糖供与体（Donor）	受容体（Acceptor）	脱リン酸化酵素	酵素活性（pmol/min/μg）	使用バッファー	反応温度
TcdB	1 mM UDP-Glc	H2O	CD39L3	154	SB＋150 mM K2SO4	23℃
KTELC1	0.2 mM UDP-Glc	H2O	CD39L3	5.2	50 mM HEPES、10 mM MnCl2、5 mM CaCl2、pH 7.5	37℃
B4GALT1	1 mM UDP-Gal	20 mM GlcNAc	CD39L3	1,033	SB	23℃
GALNT-1	1 mM UDP-GalNAc	0.4 mg/mL MUC-1	CD39L3	1,967	100 mM Tris、5 mM MnCl2、5 mM CaCl2、pH 8.0	23℃
FUT-1	40μM GDP-fucose	15 mM Lactose	CD39L3	280	25 mM Tris、10 mM MnCl2、5 mM CaCl2、pH 7.5、20％ DMSO	37℃
FUT-3	40μM GDP-fucose	0.4 mM LN	CD39L3	73.5	SB	37℃
FUT-5	40μM GDP-fucose	0.4 mM LN	CD39L3	98.8	SB	37℃
FUT-7	80μMGDP-fucose	10 mg/mL Fetuin	CD39L3	314	SB	37℃
FUT-8	64μM GDP-fucose	H2O	CD39L3	10.6	0.1 M MES、pH 7.0	23℃
B3GNT6	200μM UDP-GlcNAc	0.6 mM pNP-α-GalNAc	CD39L3	75.0 ± 3.5	SB＋20％ DMSO	37℃
MGAT5	90μM UDP-GlcNAc	1 mM Biantennary N-linked core pentasaccharide	CD39L3	84.2 ± 5.6	Buffer 1：25 mM MES、pH 6.0	37℃
					Buffer 2：100 mM Tris、5 mM CaCl2、pH 7.5	23℃
ST6GalNAc2	500μM CMP-Sialic acid	20 mg/mL Asialofetuin	CD73	773	SB	37℃
ST6GAL1	2 mM CMP-NeuAc	8 mM LN	CD73	1,074	SB	37℃

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測定例

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キット内容

• Coupling phosphatase 1（Recombinant human ENTPD3 / CD39L3）
• Phosphatase buffer 1
• UDP
• MnCl₂
• Phosphate standard（KH2PO4）
• Malachite green reagent A^＊
• Malachite green reagent B^＊

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価格

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