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脂質代謝遺伝子の発現解析用レポーターベクター pGreenFire Sterol Response Reporter Lentivector

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:4757

コレステロール代謝に関わる遺伝子群の発現制御領域の下流に、copGFPとルシフェラーゼが組み込まれたレンチウイルスベースのレポーターベクターです。コレステロール流出メカニズムの解明や、標的遺伝子特異的なLXRアゴニストの開発などに有用です。それぞれウイルス粒子にパッケージングされている製品、プラスミドDNAとして供給される製品、および各レポーターベクターが安定的に組み込まれたHepG2細胞株の製品があります。


コレステロール代謝経路における LXR の重要性

コレステロール代謝経路における LXR の重要性

生体内において脂質の恒常性を維持する上で、特に重要な役割を果たしているのが、LXR(Liver X Receptor)と呼ばれる核内レセプターです。LXR はRXR(Retinoid X Receptor)とヘテロダイマーを形成し、標的であるコレステロール制御遺伝子のプロモーター領域に含まれるLXR 応答配列に結合します。LXR 応答配列は6 つの塩基が4 塩基を挟んで2 回繰り返された配列をしており、コレステロール生成、輸送、代謝等に関与する遺伝子群のプロモーター領域で見られます。LXR は、末梢組織からのコレステロール流出を促進することによる、生体内における正常なコレステロールバランスの維持など、コレステロール代謝における重要なセンサーとしての働きが指摘されています。



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ベクターマップ



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特長

  • copGFPの蛍光により、生細胞における転写活性化を検出できます。同時にルシフェラーゼアッセイを行うことにより転写応答の定量的な評価もできます。
  • レンチウイルスベクターは、初代培養細胞や非分裂細胞といったトランスフェクションが困難な細胞を含む、ほぼすべての種類の細胞に高効率で導入できます。
  • 導入されたベクターは宿主細胞のゲノムDNAに組み込まれるため、エピジェネティックな影響などをより正確に反映した転写制御解析が期待できます。
  • mCMVプロモーターは転写応答配列がない状態では活性がほとんどなく、バックグラウンド発現は最小限に抑えられています。

プラスミドDNAの製品はコンストラクト中にRSVプロモーターを含むため、そのまま細胞に導入した場合、レポーター遺伝子のバックグラウンド発現があります。必ず、ウイルス粒子として目的細胞に感染させて下さい。

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使用例

ABCA1(#TR106)レポーターベクターを導入したHepG2細胞株

ABCA1(#TR106)レポーターベクターを導入したHepG2細胞株を、LXRアゴニストであるTO-901317で処理すると、レポーター遺伝子GFPの発現が誘導される(下段右側)。上段は未処理のコントロール。左側は同一視野の位相差像。



ルシフェラーゼアッセイ

図中に示した各レポーターベクターについて、導入された細胞をTO-901317で処理し、ルシフェラーゼアッセイを行った。アゴニストの濃度依存的に、ルシフェラーゼ活性が上昇している。

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