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糸状仮足やナノチューブなどの微細構造も明瞭に染色できる蛍光細胞膜プローブ MemGlow Plasma Membrane Probes

掲載日情報:2022/04/05 現在Webページ番号:69530

MemGlow Plasma Membrane Probeは、低濃度で使用でき, 長時間にわたって高いS/N比のイメージングができる蛍光細胞膜プローブです。高い特異性、低バックグラウンド、簡便性を併せ持っており、糸状仮足やナノチューブといった微細構造を含む細胞膜のイメージング、およびエクソソームなどの細胞外小胞のイメージングにも有用です。生細胞、固定細胞、ex vivo試料、固定組織など幅広いタイプの試料で使用可能です。

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特長

  • 脂質二重膜への結合前は自己消光ナノ粒子の形成により蛍光は最小限に抑制されますが、脂質二重膜との結合によって高輝度の蛍光を発します。
  • 簡便な染色操作で、また低濃度で使用できます。
  • 生細胞、固定細胞、ex vivo試料、および固定組織などで使用できます。
  • 毒性がないため、生細胞の長期イメージングと再イメージングが可能です。
  • ナノモル濃度で、糸状仮足およびナノチューブを効率的に標識できます。
  • 細胞膜に結合する双極性アンカーと、シアニンまたはBODIPY色素で構成されています。
  • 既存の細胞膜イメージング用の蛍光色素に比べて、優れた特性を有しています。
  • 蛍光顕微鏡、共焦点顕微鏡、2光子顕微鏡、全反射照明蛍光顕微鏡での観察に使用できます。
  • MemGlow 590は超解像度顕微鏡(STORM)での観察にも使用できます。

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MemGlow Plasma Membrane Probeの分子構造

MemGlowの分子構造



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MemGlow Plasma Membrane Probeの検出原理

MemGlowの検出原理

  1. イメージング用培地中では自己消光ナノ粒子を形成している。
  2. 細胞膜に近づくとナノ粒子が解離してMemGlow分子が膜に結合する。
  3. 細胞膜に結合したMemGlow分子は自己消光が解除され、レーザー光を照射すると蛍光を発する。

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製品の種類

製品形状は凍結乾燥ペレットです。無水DMSOでの再構成により、ご使用する用途に適した濃度のStock solutionを調製していただきます。
蛍光曲線の図をクリックすると拡大図、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品 名 Fluorogenic Membrane Probe
MemGlow 488 MemGlow 560 MemGlow 590 MemGlow 640 MemGlow 700
性状 凍結乾燥ペレット
再構成溶媒 無水DMSO
生細胞/
固定細胞
イメージング
Stock solution:20μM
Working solution:100 nM
組織/小器官
イメージング
Stock solution:200μM
Working solution:2μM
分子吸光係数 83×103 150×103 120×103 250×103 210×103
適応フィルターセット FITC Tetramethyl
rhodamine
(TRITC)
Cy3.5 Cy5 Cy5.5
蛍光曲線 MemGlow488の蛍光曲線 MemGlow560の蛍光曲線 MemGlow590の蛍光曲線 MemGlow640の蛍光曲線 MemGlow700の蛍光曲線
測定波長 励起 499 nm
蛍光 507 nm
励起 555 nm
蛍光 570 nm
励起 595 nm
蛍光 613 nm
励起 650 nm
蛍光 673 nm
励起 689 nm
蛍光 713 nm
商品
コード
2 nmol
包装品
MG01-02 MG02-02 MG03-02 MG04-02 MG05-02
10 nmol
包装品
MG01-10 MG02-10 MG03-10 MG04-10 MG05-10


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操作方法概略(培養中の生細胞の細胞膜を標識する場合)

  1. イメージングに適したガラスまたはプラスチック培養用容器に細胞を播種し、細胞株に応じた培養条件に従ってセミコンフルエントになるまで培養する。
  2. 細胞培養液を除去し、イメージングに使用する培地(無血清培地など)と交換する。この際、細胞が乾燥しないように留意する。
  3. 20μMのMemGlow stock solution 5μlをイメージング用培地1 mlに加え、十分に混和して100 nMのWorking solutionを調製する。プローブが凝集すると標識効率が低下するため、Working solutionの調製は迅速に(20秒未満)行う。
  4. 2. で細胞に加えたイメージング用培地を除去し、Working solutionを細胞が浸るまで加える。その後、室温で10分間インキュベートする。37℃でもインキュベーションできるが、エンドサイトーシスによるプローブの取り込みが加速する。
  5. イメージング前に細胞を洗浄する必要はないが、必要に応じてイメージング用培地で洗浄することもできる。
  6. イメージングを実施する。

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使用例

MemGlow 560による海馬アストロサイト糸状仮足の染色画像

MemGlow 560 Filopodia

海馬アストロサイトを20 nMのMemGlow 560で染色した、共焦点顕微鏡画像

画像出典:Collot, M., et al. 2019. [PMID: 30745238]


MemGlow 590染色した培養ニューロンの超解像度顕微鏡画像

MemGlow 590 STORM

図をクリックすると拡大します(拡大図

MemGlow 590で標識し、超解像度顕微鏡(Stochastic Optical Reconstruction Microscopy: STORM)を使用して視覚化した、培養9日目の培養海馬ニューロン

広視野(A1)で位置を特定した後、回折限界以下の解像度(A2)でイメージングした樹状突起。
画像出典:Collot, M., et al. 2019. [PMID: 30745238]


MemGlow 488によるKB細胞およびHEK293細胞のイメージング

MG01-02-figureA

KB生細胞のレーザースキャン共焦点イメージ

励起波長:488 nm、蛍光波長:500~550 nmでイメージングした。

MG01-02-figureB

HEK293生細胞のレーザー広視野蛍光イメージ

FITCフィルターセット、デジタルCCDカメラ、および40倍対物レンズを用いてイメージングした。

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FAQ

Q-1. 抗体の共標識で細胞透過性が必要な実験においてMemGlowを使用できますか?

A-1. はい。MemGlowは、最大0.1%のTriton-X100を使用した透過処理を必要とする共標識実験で正常に使用されています1


Q-2. MemGlowは、生細胞の標識に使用できますか?

A-2. はい。MemGlowは無毒で、生細胞の標識に使用できます1。イメージング後、標識細胞を通常の細胞培地に戻し、3~4日後に再度標識することができます。


Q-3. MemGlowは、組織またはエクソソームなどの他の脂質二重層を効率的に標識できすか?

A-3. はい。MemGlowは、固定組織および組織切片1ex vivo肝臓組織1、およびエクソソーム3の標識に使用されています。


Q-4. MemGlowを固定細胞に使用した場合、正確に原形質膜に局在化しますか?

A-4. MemGlowは、細胞の原形質膜に特異的に局在します。ただし、細胞膜が破壊された場合、MemGlowは細胞環境内のリン脂質を標識します。パラホルムアルデヒド固定は、原形質膜を部分的に透過性にするため、細胞内においてMemGlowシグナルの発生が予想されます。


使用文献

  1. Collot, M., et al., Cell Chem. Biol., 26(4), 600~614. (2019).
    "MemBright: A Family of Fluorescent Membrane Probes for Advanced Cellular Imaging and Neuroscience." [PMID:30745238]
  2. Collot, M., et al., Bioconjug. Chem., 30(1), 192~199 (2019).
    "BODIPY with Tuned Amphiphilicity as a Fluorogenic Plasma Membrane Probe." [PMID:30562000]
  3. Hyenne, V., et al., Dev. Cell, 48(4), 554~572.e7 (2019).
    "Studying the Fate of Tumor Extracellular Vesicles at High Spatiotemporal Resolution Using the Zebrafish Embryo." [PMID:30745140]

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関連製品 MemGlow NR Membrane Polarity Probes

MemGlow NR Membrane Polarity Probeは、原形質膜を標的とする光安定性のソルバトクロミック色素です。MemGlow NRが原形質膜のリン脂質(ジオレオイルホスファチジルコリン)より構成されている液体秩序相(Lo)と結合すると、スフィンゴミエリンで構成されている液体無秩序相(Ld)に比べて45~50 nmの蛍光波長のシフトが生じることを利用して原形質膜の局所的な化学極性のナノスケールでの分布を調べることができます。下図をクリックすると詳細をご覧いただけます。

MemGlow NR Membrane Polarity Probeの相分離構造の解析原理図

MemGlow NR Membrane Polarity Probeの相分離構造の解析原理図

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価格

MemGlow 488 Fluorogenic Membrane Probe

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(テクニカルサポート 試薬担当)

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