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高い精製度の細胞外小胞(EV)を簡便かつ高収率で単離できます! ExoQuick ULTRA / ExoQuick-TC ULTRA【ユーザーレビューあり】

掲載日情報:2019/09/17 現在Webページ番号:67903

血清、血漿または組織培養液から、ExoQuickまたはExoQuick-TCによりエクソソームなどの細胞外小胞(EV)を沈殿させ、次いで専用カラムによりアルブミンや免疫グロブリンなどの夾雑物質を除去することにより、高精製度のEVを簡便かつ高収率で単離できるキットです。EVの収率、精製度、簡便性とコストパフォーマンスの全てを兼ね備えた画期的なEV調製キットです。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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SDS-PAGEによる比較

使用例 1.
(A)異なる製品で調製したエクソソームのSDS-PAGEによる比較
ExoQuick PLUSExoQuick ULTRA(本製品)、他社エクソソーム調製キット(Company A)および超遠心分離によりそれぞれ調製したエクソソームでSDS-PAGE解析(クマシーブルー染色)を行った。ExoQuick ULTRAを用いて調製したエクソソームは、他の方法で調製したエクソソームに比べ夾雑タンパク質が少ないことがわかる。

(B)異なる製品で調製したエクソソーム中の各種タンパク質含量のウエスタンブロッティングによる比較
ExoQuick PLUSExoQuick ULTRA、他社エクソソーム調製キット(Company A)および超遠心分離によりそれぞれ調製したエクソソーム7μg(全タンパク質含量として)をウエスタンブロッティングにより分析した。ExoQuick ULTRAを用いて調製したエクソソームは、キャリーオーバーによるアルブミンやIgGHの含有量が他の方法で調製したエクソソームに比べて少ない一方で、エクソソームの特異的マーカーであるCD9、CD81およびHsp70の含有量が高いことがわかる。

製品の種類

商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

品名 ExoQuick ULTRA ExoQuick-TC ULTRA
対象試料 血清、血漿* 組織培養液
商品コード EQULTRA-20A-1 EQULTRA-20TC-1
回数 20 reactions
添加量(試料:ExoQuick) 250μl:67μl 5 ml:1 ml

*血漿試料については、オプションでThrombin(#TMEXO-1)の添加が推奨される場合があります。



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特長

  • ExoQuick-TC ULTRAでは、アルブミンおよび免疫グロブリンの混入を、従来法と比べてそれぞれ75%または40%も削減でき、精製度が高いEVが得られます。
  • 他の方法と比べ、同一の試料量から、より多くのEVを回収できます。
  • ExoQuick-TC ULTRAでは、EV特異的なバイオマーカーの検出感度が、最大11倍(CD9)および8倍(CD81)増加します。
  • コストパフォーマンスに優れています。
  • 得られたエクソソームは、ウエスタンブロッティング、MS解析、NGS、エクソソームの標識、in vivo / ex vivoでのエクソソームを介した輸送実験などに使用できます。
  • 操作時間:20分以下(インキュベーション時間などを除く)

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操作方法概略

操作方法概略

* ExoQuickの場合、4℃、30分間。ExoQuick-TCの場合、4℃、overnight

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使用例

透過型顕微鏡(TEM)像

使用例 2.
透過型顕微鏡(TEM)像
ヒト血漿からExoQuick ULTRAで調製したエクソソームを、透過型顕微鏡(TEM)により異なる倍率で観察した。典型的なEVの形態を有する複数の粒子が観察できる。

EV粒子の収率の比較

使用例 3.
EV単離法の違いによるEV粒子の収率の比較
ExoQuick ULTRA、他社製品および超遠心法により、それぞれ血清から単離したエクソソームをfNTA法(蛍光ナノ粒子トラッキング解析法)で計数し、用いた血清の量当たり(A)または、血清タンパク質の量当たり(B)でグラフにした。

A. 血清1 ml当たりから単離されたEV粒子数
B. 血清タンパク質1 mg当たりから単離されたEV粒子数

夾雑アルブミン量の比較

使用例 4.
エクソソームの収量および夾雑アルブミン量の比較(1)
ExoQuick PLUSExoQuick-TC ULTRA、他社製エクソソーム調製キット(Company A)および超遠心分離によりそれぞれ調製したエクソソームを、エクソソームに特異的なマーカーであるCD63量と、夾雑物質であるアルブミン量をウエスタンブロッティングにより比較した。ExoQuick-TC ULTRAを用いた場合は最もCD63量が多い一方で、夾雑のアルブミン量は最も少ないことがわかる。

夾雑アルブミン量の比較2

使用例 5.
エクソソームの収量および夾雑アルブミン、IgG量の比較(2)
(A):ExoQuick ULTRAおよび他社製エクソソーム調製キット(Company B)によりそれぞれ血清から調製したエクソソームを、エクソソームに特異的なマーカーであるCD63、CD81の量と、夾雑物質であるアルブミン、IgG(H鎖およびL鎖)量をウエスタンブロッティングにより比較した。ExoQuick ULTRAを用いた場合はCD63、CD81の量が多い一方で、夾雑のアルブミン、IgG(H鎖)量がより少ないことがわかる。

(B):ExoQuick ULTRAシリーズ および他社製エクソソーム調製キット(Company B)によりそれぞれ細胞培養液または血清から調製したエクソソームを、ExoGlow-NTA Fluorescent Labeling Kitで蛍光標識後、fNTA法(蛍光ナノ粒子トラッキング解析法)で計数し、用いたタンパク質の量当たりでグラフにした。

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キット内容

  • ExoQuick(またはExoQuick-TC)*
  • Purification column
  • Collection tube
  • 2 ml Eppendorf tube
  • Buffer A/B

* キットにより内容が異なります。

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ユーザーレビュー


ExoQuick ULTRAを用いたエクソソーム抽出

森本 悟 特任助教
 慶應義塾大学 医学部 生理学教室

岡野 栄之 教授(左)、森本 悟 特任助教(右)

背景

当研究室(岡野 栄之 教授)では、疾患特異的iPS 細胞技術を用いて、様々な神経変性疾患や精神疾患の病態解明ならびに創薬研究を精力的に行っている。特に、私たちのグループでは、根治療法の存在しない神経難病である筋萎縮性側索硬化症(ALS)を主たるテーマとし、病態に関わる新たなバイオマーカーを見つけるべく体液中エクソソーム(マイクロパーティクル)に着目した。体液中には脳や脊髄から放出されるエクソソームも含まれており、この小さな粒子から病気のサインや状態を知ることができるのではないかと期待している。


使用結果

エクソソームの分離精製には、これまで超遠心法(分画超遠心分離法)がスタンダードな方法として用いられてきた。しかしながら、①プロセスに時間がかかる、②大量のサンプルを同時に処理することが難しい、③超遠心機が必要、といった問題点があった。私たちは、疾患研究のために多くのサンプルから効率よく迅速にエクソソームを抽出したいと考え、ExoQuickULTRA を使い始めた。

本キットは、サンプルと試薬を混合することでエクソソームを沈殿させ、更にカラム精製を組み合わせることで、体液中の余分なタンパク質の混入を低減しつつ、通常の遠心機のみで簡便かつ比較的短時間にエクソソームを得ることができる利点がある。

実際に、ヒトの血液から脳や脊髄由来の臓器特異的エクソソームを抽出し、ナノ粒子解析システムで計測した結果を示す( 図1 )。比較的均質なマイクロパーティクルを濃縮できたことが確認でき、さらに血液以外の試料についても同様に信頼性のある濃縮結果を得られている。


以上から、エクソソームを分離精製する際に、従来からの超遠心法は使用実績の高い優れた方法ではあるが、多くの試料を扱う場合や、簡便に夾雑物の少ない高純度なエクソソームを得たい場合に、本キットの使用をお勧めしたい。

ExoQuick ULTRA による血液由来エクソソーム純化後の、ナノ粒子解析システムを用いた測定結果

図1:ExoQuick ULTRA による血液由来エクソソーム純化後の、ナノ粒子解析システムを用いた測定結果を示す。比較的均質なマイクロパーティクルのピークを認める。

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価格

[在庫・価格 :2024年03月29日 15時15分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
ExoQuick ULTRA EV Isolation Kit for Serum and Plasma, 20reactions
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
エクソソームなどの細胞外小胞(EV)を沈殿させ,次いで専用カラムによりアルブミンや免疫グロブリンなどの夾雑物質を除去することにより,高精製度のEVを簡便かつ高収率で単離できるキット。試料:血清,血漿,処理数:20 reactions。
法規制等
保存条件 4℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年10月15日号 p.13

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法規制等
保存条件 4℃ 法規備考
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ExoQuick ULTRA EV Isolation Kit for Serum and Plasma, 20reactions

文献数: 0

説明文 エクソソームなどの細胞外小胞(EV)を沈殿させ,次いで専用カラムによりアルブミンや免疫グロブリンなどの夾雑物質を除去することにより,高精製度のEVを簡便かつ高収率で単離できるキット。試料:血清,血漿,処理数:20 reactions。
法規制等
保存条件 4℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年10月15日号 p.13

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説明文 エクソソームなどの細胞外小胞(EV)を沈殿させ,次いで専用カラムによりアルブミンや免疫グロブリンなどの夾雑物質を除去することにより,高精製度のEVを簡便かつ高収率で単離できるキット。試料:組織培養液,処理数:20 reactions。
法規制等
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掲載カタログ ニュース2022年10月15日号 p.13

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納期 文献数
Thrombin Plasma prep for Exosome precipitation (100x Thrombin)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
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Thrombin Plasma prep for Exosome precipitation (100x Thrombin)

文献数: 0

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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