AChE活性を指標にしてエクソソーム数を概算定量するキット[比色] EXOCET Exosome Quantitation Kit
掲載日情報：2018/05/24 現在Webページ番号：53137
エクソソームに含まれるAcetyl-CoA Acetylcholinesterase(AChE)の活性を短時間で比色定量するキットです。AChE活性を指標にして、エクソソーム数を概算定量できます。
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Exosome(エキソソーム、エクソソーム)定量キットのラインナップ
| 品名 | ExoELISA-ULTRA | ExoELISA | EXOCET | FluoroCet |
|---|---|---|---|---|
| 特長 | CD63またはCD81をマーカーとし、抗体を用いた高感度なエクソソーム定量が迅速に行えるキット | CD9, CD63またはCD81をマーカーとし、高感度なエクソソーム定量を行うキット | 抗体の結合を用いず、AChE活性を指標に迅速（20分）にエクソソームを概算定量できるキット | 蛍光法を用いて、AChE活性を指標に少ない試料量でもEXOCETの30倍以上の感度でエクソソームを概算定量できるキット |
| 検出方法 | 比色 | 比色 | 比色 | 蛍光 |
| 作業時間 | 4時間 (O/Nインキュベーション不要) | 24時間 | 20分 | 60分 |
| 必要試料タンパク質量 | 1～200 µg | >500 µg | 50 µg | ＜1 µg |
| 商品コード | EXEL-ULTRA | EXOEL | EXOCET96A-1 | FCET96A-1 |
Acetyl-CoA Acetylcholinesterase(AChE)の活性を蛍光により定量するキットはこちら→FluoroCet Ultrasensitive Exosome Quantitation Assay Kit
ヒト由来エクソソーム中のマーカータンパク質を、ダイレクトELISAで定量するキットはこちら→ExoELISA ELISA Kit
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特長
- エクソソームに含まれるAChE活性1,2を利用して、エクソソーム量を測定します。
- 405 nmでのAChE活性の比色定量により、短時間（20分）でエクソソームの定量が行えます。
- 各種エクソソーム精製法（ExoQuick, ExoQuick-TC*、超遠心、免疫アフィニティクロマトグラフィー）により得られたエクソソームから測定できます。
- ヒト、ラット、マウス由来のエクソソームの測定が可能です。
- スタンダードとして組換え体AChEが付属します。スタンダードは、NanoSightであらかじめ測定されたエクソソーム数によってキャリブレーションされています。
- 1キットには、96回の反応を行える試薬が含まれています。
- 試料量（タンパク質量）：50μg
- 測定波長：405 nm
- 操作時間：20分
＊ExoQuick, ExoQuick-TCの詳細は「ExoQuick Exosome Precipitation Solutionシリーズ」をご覧下さい。
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参考文献
- Ariel Savina, Michel Vidal, Maria I., Colombo., The exosome pathway in K562 cells is regulated by Rab11, J. Cell Sci., 115 (pt 12):2505～2515 (2015).
- Sanjiv Gupta and A. A. Knowlton., HSP60 trafficking in adult cardiac myocytes: role of the exosomal pathway, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., 292 (6): H3052～H3056 (2007), Epbu 2007 Feb 16.
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操作方法概略
A. 試料の調製
試料には、凍結したエクソソームのペレットか、濃縮されたエクソソーム（約107エクソソーム、2μg/μl）を推奨します。
- 試料が凍結している場合は、氷上で融解させる。
- 3,000×gで15分間遠心し、細胞と細胞残渣を取り除く。
- 上清を、蓋ができる滅菌済みの丸形容器に移し、下記の表を参考にして適当な量のExoQuickまたはExoQuick-TCを加える。
- 3回転倒混和させる。
- 表に従い、30分または1晩、5℃で静置する。
- 1,500×gで5分間遠心し水分を除く（ペレットに触らないように）。
- ペレットに1 mlのPBS buffer(キットに含まれておりません)を加え、15秒間ボルテックスで混和する。
- 37℃で5分間インキュベートし、エクソソームタンパク質を遊離させる。
- 15秒間ボルテックスで混和する。
- 1,500×gで5分間遠心し、残渣を沈殿させる。
- 氷上に置いた新しい遠心管に上清を移す。
- 酵素活性を測定する。
| Incubation time at 5℃ | Bio-fluid | Sample volume | ExoQuick volume | ExoQuik-TC volume |
|---|---|---|---|---|
| 30 minutes | Serum | 250μl | 63μl | none |
| Overnight | Ascites fluid | 250μl | 63μl | none |
| Overnight | culture media | 5 ml | none | 1 ml |
| Overnight | Urine | 5 ml | none | 1 ml |
| Overnight | spinal fluid | 5 ml | none | 1 ml |
B.標準曲線の作成
アッセイごとに標準曲線を作成して下さい。
- マイクロチューブを用い、EXOCET standardをPBSで段階希釈する。
- 下記の表を参考にして、標準曲線を作成するための適切な希釈を行う。標準曲線をduplicateで測定したい場合には、量を2倍に増やし、別々のウェルに注ぐ。
| Tube | # Exosomes | Dilution factor | EXOCET standard | PBS buffer |  |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1.28E+10 | 1 | 120μl | 0 | |
| 2 | 6.40E+09 | 1：2 | 60μl (from tube 1) | 60μl | |
| 3 | 3.20E+09 | 1：4 | 60μl (from tube 2) | 60μl | |
| 4 | 1.60E+09 | 1：8 | 60μl (from tube 3) | 60μl | |
| 5 | 8.00E+08 | 1：16 | 60μl (from tube 4) | 60μl | |
| 6 | 4.00E+08 | 1：32 | 60μl (from tube 5) | 60μl | |
| 7 | 2.00E+08 | 1：64 | 60μl (from tube 6) | 60μl | |
| blank | 0.00E+00 | blank | 0 | 60μl |
C.EXOCETアッセイの実際
- アッセイの回数に従い、直前にEXOCET buffer AとBを混和して、新鮮なEXOCET reaction bufferを必要量調製する。もし20回EXOCET反応を行う場合、新しいチューブに1 mlのbuffer Aと10μlのbuffer Bを加え、良く混和し、2～4時間以内に使用する。
- 透明な96ウェルプレートに、50μlの新鮮なReaction bufferを加え、次に50μｌの希釈したEXOCET standardまたはエクソソーム試料を加える。
- プレートシーラーなどで封をして、室温で10～20分インキュベートする（10～20分が標準曲線作製に適している）。
- 405 nmの吸収を測定できるプレートリーダーで測定する。
D.測定例
| Exos | x10^7 | Avg of OD405 |
|---|---|---|
| 1.28E+10 | 1280 | 1.494 |
| 6.40E+09 | 640 | 0.820 |
| 3.20E+09 | 320 | 0.3995 |
| 1.60E+09 | 160 | 0.1905 |
| 8.00E+08 | 80 | 0.1235 |
| 4.00E+08 | 40 | 0.0515 |
| 2.00E+08 | 20 | 0.0245 |
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標準曲線のデータ例
96ウェルプレートの画像（左：標準試料、中央：血清エキソソーム、右：ヒト乳腺がん由来細胞 MDA-MB-231エキソソーム）、および標準試料の吸光度をプロットして得られた標準曲線。
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キット内容
- Exoxome lysis buffer
- EXOCET buffer A, B
- PBS-B buffer（滅菌済み）
- EXOCET standard
- 96 well assay plate (12×8 strips)
※本製品にプレートシーリングフィルムは含まれていません。別途ご用意下さい。
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月23日 16時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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EXOCET Exosome Quantitation Kit |
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[在庫・価格 ：2024年04月23日 16時55分現在]
EXOCET Exosome Quantitation Kit
文献数： 0
- 商品コード：EXOCET96A-1
- メーカー：SBI
- 包装：1kit
- 価格：¥101,000
- 在庫：1個
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
エキソソーム（exosome,エクソソーム）の定量を，エキソソームに含まれるAcetyl-CoA Acetylcholinesterase(AChE)活性を短時間で比色定量できるキット。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃,-20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2022年10月15日号 p.18
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| 製品記事 |
エクソソーム（Exosome）研究用製品特集 |
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ExoQuick Exosome Precipitation Solutionシリーズ
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