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試薬記事カテゴリー
[掲載日情報：2005/06/20 現在]
相同組換えを利用した画期的な 遺伝子改変ツール Red / ET Recombination System
斬新な DNA 工学技術である Red / ET Recombination 技術は Gene Bridges 社の創始者の一人である Prof. A. Francis Stewart により考案されたもので，Gene Bridges 社は EMBL （ European Molecular Biology Laboratory ）よりその特許の独占的通常実施権を得ています。Red / ET Recombination 技術は DNA クローニングと変異体作製の分野においてサイズ，精密な操作，改変の点でブレークスルーをもたらす技術です。今回は本システムを利用した 4 種類のキットおよび各種薬剤耐性遺伝子カセットの PCR テンプレートをご紹介します。
組換え酵素ペア Redα / Redβ（または RecE / RecT ）による Double - strand Break Repair（ DSBR ）
＋＋＋ : primary application，＋＋ : secondary application，＋ : tertiary application
※上記以外にも様々な実験に適用できます。詳細は，Gene Bridge 社ホームページをご覧下さい。
※営利団体・企業（ Commercial Entity ）にご所属の方が Red / ET Recombination テクノロジーを使用するためには， メーカーとのライセンス契約を締結していただくほか， ライセンス料が別途必要となります。詳細は当社テクニカルサポート（試薬担当： 下記参照 ） までお問い合わせ下さい。
Red /ET Recombination System 関連製品サブライセンス確認書
- Quick and Easy BAC MODIFICATION Kit
- Counter - Selection BAC MODIFICATION Kit
- Red / ET Recombination BAC SUBCLONING Kit
- Quick and Easy E.coli Gene Deletion Kit
- 薬剤耐性遺伝子カセットの PCR テンプレート
特長
- 従来のクローニング技術では配列長約 20 kb が上限でしたが，Red / ET Recombination 技術を用いることにより，200 kb を優に超える配列をクローニングできます。
- E. coli の内在性プルーフリーディングおよび修復機構を利用しているため，PCR を用いる際に問題となる変異の導入を避けることができます。
- Red / ET Recombination は制限酵素部位とは無関係に作用するため，DNA 配列中のどの位置でも挿入や欠失，点変異などの改変が可能です。
- BAC，PAC，プラスミドベクター，コスミド，または E. coli 染色体等の DNA 改変を行えます。
- 本製品に含まれる pSC101 - BAD - gbaAtet vector は L - arabinose の添加によって Red / ET Recombination protein の発現が誘導されます。また温度感受性ベクターのため，簡単に除去できます。
原理
組換え酵素ペア Redα / Redβ（または RecE / RecT ）による Double - strand Break Repair（ DSBR ）
- Redα（または RecE ）の 5' → 3' エキソヌクレアーゼ活性により 3' 側の DNA が一本鎖になる。
- この突出した 3' 側の 一本鎖 DNA に Redβ（または RecT ）が結合する。
- タンパク質−核酸フィラメントに，相同な DNA が結合し，3' 末端がプライマーとなり複製される。
適用例
| Quick and Easy BAC MODIFICATION Kit | Counter - Selection BAC MODIFICATION Kit | BAC SUBCLONING Kit | |
|---|---|---|---|
| E. coli 染色体の改変 | ＋＋＋ | ＋＋ | |
| E. coli 染色体を選択マーカーを残さずに改変 | ＋＋＋ | ||
| E. coli 染色体からのサブクローニング | ＋＋＋ | ||
| BAC，PAC，コスミド，プラスミドベクターから不要な配列を欠失 | ＋＋＋ | ＋＋ | |
| BAC，PAC，コスミド，プラスミドベクターから選択マーカーを残さずに不要な配列を欠失 | ＋＋＋ | ||
| BAC，PAC，コスミド，プラスミドベクターからのサブクローニング | ＋＋＋ | ||
| BAC 挿入断片の欠失および連結 | ＋＋＋ | ||
| 任意の配列を選択マーカーを残さずに挿入 | ＋＋＋ | ||
| 融合タンパク質発現ベクターの作製 | ＋＋＋ | ＋ | |
| 融合タンパク質発現ベクターを選択マーカーを残さずに作製 | ＋＋ | ||
| レポーターベクターの作製 | ＋＋＋ | ＋＋ | |
| ターゲティングベクターの作製 | ＋＋＋ | ＋ | ＋＋ |
| コンディショナルターゲティングベクターの作製 | ＋＋＋ | ＋ | ＋＋ |
| トランスジェニックベクターの作製 | ＋＋＋ | ||
| トランスジェニックベクターを選択マーカーを残さずに作製 | ＋＋＋ |
※上記以外にも様々な実験に適用できます。詳細は，Gene Bridge 社ホームページをご覧下さい。
購入時のご注意
本製品は， 大学・官公庁研究所（ Academic ）にご所属の方のみご購入いただけます。また， ご購入に際して事前にライセンス使用許可が必要です。詳細は，サブライセンス確認書をご覧下さい。※営利団体・企業（ Commercial Entity ）にご所属の方が Red / ET Recombination テクノロジーを使用するためには， メーカーとのライセンス契約を締結していただくほか， ライセンス料が別途必要となります。詳細は当社テクニカルサポート（試薬担当： 下記参照 ） までお問い合わせ下さい。
Red /ET Recombination System 関連製品サブライセンス確認書
お問い合わせ先（テクニカルサポート 試薬担当）
製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。