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shRNA^mir を発現する組換え体レンチウイルスのプールを用いて，目的のヒト遺伝子を発現抑制するshRNA^mir 配列をスクリーニングすることができるキットです。疾患モデル等の表現型に対する原因遺伝子の探索に最適です。
目的の表現型を示す細胞を選別し，標的遺伝子の同定を行う Positive Selection Kit と，薬剤などで処理した細胞集団で死滅または増殖した表現型を未処理の集団と DNA マイクロアレイにより比較してハイスループットに同定する Negative Selection Kit があります。それぞれのキットには全ゲノムを対象とした 70,000 種類のプールからなる製品（Whole Genome Kit）と，遺伝子情報がそろった 30,000 種類のプールからなる製品（Annotated Gene Kit）があります。

特長

• キットにはそれぞれ 10,000 種類のshRNA^mir 配列が組み込まれた，7 種類または 3 種類の組換え体レンチウイルスのプールが含まれており，全体で 70,000 種類または 30,000 種類のプールとなっています。
• Negative Selection Kit には，2 アッセイ分のウイルスプールが含まれています。
• それぞれのプールは HEK293T 細胞で力価を確認しており，＞ 5 × 10⁸ TU/ml の高い力価になっています。
• shRNA^mir 配列は強力なレンチウイルスベクターである pGIPZ に組み込まれています。
• shRNA^mir は本来の microRNA 初期転写物を模倣するようにデザインされ，特異的プロセッシングにより，効果的に遺伝子発現抑制を行うことができます。

※shRNAmirデザインの特長およびpGIPZレンチウイルスベクターの特長については，フナコシホームページから，キーワード「shRNAmir」で検索して下さい。

操作法概略

■ Positive Selection Kit の場合

1. 1 つの細胞に 1 コピーの shRNA^mir が導入されるように，細胞にウイルス粒子のプールを加える。
2. 目的の表現型を誘導，または抑制する処理（X 線照射，薬剤・小分子の投与，ウイルス感染，アポトーシス誘導，細胞外マトリックス非存在下など）を行う。
3. 期待した表現型を示した細胞を選択する。
4. 選択した細胞からゲノム DNA を抽出し，キットに含まれる Amplification primer を用いた PCR で shRNA^mir 配列を増幅する。増幅した shRNA^mir 配列をキットに含まれる Sequencing primer を用いて，配列決定する。
5. Open Biosytems 社ホームページ で，shRNA^mir 配列の検索を行い，標的遺伝子を同定する。

■ Negative Selection Kit の場合

1. 1 つの細胞に 1 コピーの shRNA^mir が導入されるように，細胞にウイルス粒子のプールを加える。
2. shRNA^mir を導入した細胞集団を 2 つに分け，片方の集団に目的の 表現型を誘導，または抑制する処理を行う。
3. 処理，未処理の双方の細胞集団からゲノム DNA を抽出し，キットに含まれる Barcode amplification primer で shRNA^mir のバーコード配列を増幅する。バーコード配列は個々の shRNA^mir に 1 対 1 で対応しているため，shRNA^mir を識別できる。
4. 増幅した DNA 断片を Cy3 または Cy5 で標識する。
5. DNA マイクロアレイで未処理の細胞集団と処理済みの細胞集団における shRNA^mir を比較し，変化のあった shRNA^mir をバーコード配列から同定する。

キット内容

■ 共通

• RNAi viral screening pools（7 種類または3 種類）
• Non-silencing control

■ Positive Selection Kit

• Non-silencing DNA positive control
• Forward/reverse primer for shRNA amplification
• Sequencing primer

■ Negative Selection Kit

• GIPZ human barcode array
• Forward/reverse primer for barcode amplification

価格

■Positive Selection Kit ■Negative Selection Kit ■キット別売品

Open Biosystems製品ご購入時のご注意

※本ページに掲載の製品をご注文の際は，フナコシホームページに掲載のOpen Biosystems専用注文書に必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。
※shRNA^mir 発現ベクターおよび発現ベクターを含む製品を購入された場合，製品のご使用は購入した研究室に限定されます。
※本製品を複数の研究室でご使用になる場合は，複数使用の契約を締結していただく必要があります。
※shRNA^mir発現ベクターおよび発現ベクターを含む製品を商用目的で使用される場合は，Cold Spring Harbor Laboratoryと商用契約を締結していただく必要があります。
※詳細は，当社受託・特注品業務担当までお問い合わせ下さい。

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