定番のクローニングでメチル化率を解析 | Bisulfite処理によるメチル化解析受託サービス | DNAメチル化 | エピジェネティクス

試薬記事カテゴリー

[掲載日情報：2012/03/29 現在]

亜硫酸水素塩（bisulfite）処理したゲノムから独自に設計したプライマーを用いてPCRテンプレートを取得し，複数のE. coliに形質転換した上でシークエンシングを行います。ゲノム対象領域のメチル化率を定性的に反映したコロニー数分の配列結果を得ることができます。

1. プライマーデザインと合成（配列の検証と複数プライマーセットの設計，合成）

2. 亜硫酸水素塩処理

3. PCR検証

4. ベクターへのライゲーション（100 bp程度の領域，PCR産物精製）

5. E. coliへの形質転換からシークエンシングまで（20クローンのクローニング，シークエンシング，報告）

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