核または細胞質において転写活性や情報伝達に関わるタンパク質の相互作用を，in vivo で解析できる酵母 Two-Hybrid System（Y2H）です。粗面小胞体膜上で全長の目的タンパク質（bait および prey）を発現させることにより，相互作用のあるタンパク質のスクリーニングを効率良く行うことができます。

• Split-ubiquitin（下記「原理」参照）法を用いた Two-Hybrid システムです。
• 目的とするタンパク質に相互作用するタンパク質の検出，相互作用領域の決定，cDNA ライブラリーからの結合タンパク質スクリーニングなどに有用です。
• 宿主酵母（NMY51） は bait-prey の相互作用により，ADE2, His3 および lacZ をレポーターとして発現します。
• ADE2 の発現によりコロニーの色が赤から白へと変化するため，1 次スクリーニングが容易です。
• His3 の発現を SD 選択培地での培養でスクリーニングできます。
• lacZ の発現をβ-ガラクトシダーゼアッセイで検出します。
• NubG（ユビキチン変異N 末端領域）を融合させた cDNA ライブラリー^* を使用して，目的のタンパク質と相互作用するタンパク質をスクリーニングできます。

＊cDNA ライブラリーについてはこちらをご覧下さい。

bait はユビキチン C 末端領域（Cub）- 人工転写因子（LexA-VP16）との融合タンパク質として，prey はユビキチン変異N 末端領域（NubG）との融合タンパク質として宿主酵母（NMY51）で発現させます。bait と prey が相互作用すると Cub と NubG によりユビキチン（これを split-ubiquitin と呼ぶ）が再構成され，ユビキチン特異的プロテアーゼ（UBPs）によって Cub C 末端から LexA-VP16 が切り離されます。LexA-VP16 は核内に移行し，レポーター遺伝子である ADE2，His3 および lacZ が発現されることにより，タンパク質の相互作用を解析できます。

• pDHB1 bait vector
• pPR-N prey/library vector
• pDHB1-largeT control bait vector
• pDSL- Δp53 control prey vector
• pAl-alg5 functional control vector
• NMY51 yeast reporter strain

※酵母は凍結乾燥品で納品されますが，製品到着後直ちに YPAD プレートで培養し，保管して下さい。