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アポトーシス研究用試薬 ＜特集＞


アポトーシス研究用試薬 ＜特集＞

アポトーシスの研究に有用な製品をキットを中心にご紹介します。
ここに紹介した製品以外にも，アポトーシス関連研究用キット ・ 試薬を各種ご用意しています。

※製品記事は掲載時点の情報となります。掲載日情報にご注意下さい。

DNA 断片化

　アポトーシスに伴って起こるクロマチン DNA のヌクレオソーム単位での断片化は, アポトーシスに特徴的な指標です。断片化された DNA の検出には, DNA ラダーをアガロースゲル電気泳動により検出する方法や, 標識された断片化 DNA の末端を特異的に標識し, 光学顕微鏡, 蛍光顕微鏡, フローサイトメーターなどを用いて検出する方法があります。

細胞膜構造変化

正常な細胞では, 細胞膜の内膜と外膜でリン脂質に偏りがあります。ホスファチジルセリンなどの陰イオン性リン脂質は, 細胞膜の内膜に局在していますが, アポトーシスの初期段階では膜構造が変化し, 細胞外膜上に露出します。
こうした膜構造の変化の検出に, 露出したホスファチジルセリンに Ca2+ 存在下で特異的に結合するタンパク質, Annexin V が用いられます。ネクローシスでは膜構造が完全に崩壊し, Annexin V による染色は内膜にも及びますが, アポトーシス細胞では外膜のみとなります。
この変化は, DNA 断片化やクロマチン凝縮に先行して起こり, アポトーシス初期の検出に有用です。

細胞膜構造の変化と Annexin V の結合図
　細胞膜構造の変化と Annexin V の結合
アポトーシスの初期に細胞膜構造が変化し, 正常細胞では脂質二重膜の内側に存在するホスファチジルセリンが細胞膜の外側に露出する。
その陰性荷電したリン脂質に Ca2+ 依存的に Annexin V が結合することを利用してアポトーシス細胞を検出する。

ミトコンドリア膜電位消失

ミトコンドリア膜電位の消失はミトコンドリア膜上に局在する Bax の活性化により引き起こされます。
その結果, cytochrome c や AIF （ apoptosis inducing factor ）が細胞質中に漏出し, アポトーシス特異的なプロテアーゼである caspase を活性化してアポトーシスを進行させます。
一方, ミトコンドリア膜電位消失を防ぎ, アポトーシス抑制に働く因子として Bcl - 2 や Bcl - XL が知られています。
ミトコンドリア膜電位の低下を検出するため, ミトコンドリア膜透過性の陽イオン性蛍光試薬を用いて, 蛍光強度や蛍光色の違いを観察する方法が一般的です。

アポトーシス関連酵素活性

　caspase はアポトーシスシグナル伝達において中心的な役割を果たすシステインプロテアーゼです。
哺乳類では少なくとも 14 種類の caspase ファミリーに属する分子の存在が明らかになっています。

caspase は活性の低い前駆体（ pro - caspase ）として細胞内に存在し, 細胞死刺激を受けるとプロセシングされて活性型となります。アポトーシス誘導時には caspase ファミリーにより形成されるプロテアーゼのカスケードが活性化され, 細胞質または核内の基質を切断し, 細胞の形態的, 生化学的変化を引き起こします。
caspase 活性の測定法としては, 細胞抽出液中に caspase 特異的基質を加え, その切断活性を調べる方法が一般的です。

哺乳類の caspase ファミリー（哺乳類の caspase ファミリー）

製品一覧
APO ACTIVE 3 Kit ｜ 　活性化型caspase - 3 の検出キット
APO LOGIX Caspase Detection Kit ｜ 　アポトーシスを起こした細胞を高感度に検出
BioVision社Caspase関連キット別売品 ｜ 　
CV - Caspase - 3 & 7 Detection Kit ｜ 　
CaspGLOW Active Caspase Staining Kit ｜ 　
Caspase Assay Kit ｜ 　
Caspase Assay Kit for Drug Discovery ｜ 　
Caspase Substrate/Inhibitor QuantiPak ｜ 　
Cathepsin Activity Assay Kit ｜ 　
DNA Damage/PARP Assay Kit ｜ 　
Granzyme B Assay Kit for Drug Discovery ｜ 　　
PARG Assay Kit ｜ 　PARG 活性測定キット
PARP Cleavage WB Kit ｜ 　
Universal PARP Assay Kit ｜ 　PARP 活性測定キット
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その他の検出キット

ELISA 系ベースのアポトーシス検出キットなどがあります。

関連抗体

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[掲載日情報：2008/04/14 現在]


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