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試薬記事カテゴリー
[掲載日情報：2006/07/31 現在]
small RNA のクローニングキット DynaExpress miRNA Cloning Kit
siRNA, miRNA などの small RNA（ 18 〜 28 mer ）を包括的にクローニングするキットです。Ready - to - use の試薬によりラジオアイソトープを用いずにクローニングを行うことができます。新規 miRNA の探索, 配列決定に有用です。
（ 1 ）
3' リンカーをライゲーションした
3' リンカー（ MI - 3' linker ）がライゲーションされた miRNA は 36 〜 46 mer に泳動される（ 白の破線で囲まれた部分 ）。この領域を切り出し RNA extraction buffer を用いて抽出する。
ゲル組成：変性ポリアクリルアミドゲル（ 10 ％ ）
（ 2 ）
miRNA の抽出
5'リンカー（ MI - 5' linker ）および 3' リンカーがライゲーションされた miRNA は 53 〜 63 mer に泳動される（ 白の破線で囲まれた部分 ）。この領域を切り出し RNA extraction buffer を用いて抽出する。
ゲル組成：変性ポリアクリルアミドゲル（ 10 ％ ）
（ 3 ）
5' リンカーをライゲーションしたmiRNA の抽出
CHO 細胞の全 RNA から単離した miRNA 画分に 3' および 5' リンカーをライゲーションし，RT - PCR を行った。約 60 bp を中心とする部分に miRNA 由来の PCR 産物が確認される。
Lane 1：DynaMarker DNA Low
Lane 2：RT - PCR 産物（ 2μl ）
Lane 3：RT - PCR 産物（ 5μl )
特長
- クローニング過程での small RNA のライゲーション産物は, Guide size marker と Gel IndicatorTM RNA Staining Solution により確実に分離でき, クローニングで問題となる副生成物を除く事ができます。
- small RNA のクローニング試薬が 8 回分, および全 RNA からの small RNA 抽出試薬が 2 回分含まれています。
- 詳細な step - by - step プロトコルが添付されています。
- 迅速（ 10分 ）かつ高効率（ ＞ 1 × 108 / 100 μl ）の Jet Competent E. coli Cell が含まれているキットもあります。
small RNA クローニングステップ
（ 1 ）
3' リンカーをライゲーションした
3' リンカー（ MI - 3' linker ）がライゲーションされた miRNA は 36 〜 46 mer に泳動される（ 白の破線で囲まれた部分 ）。この領域を切り出し RNA extraction buffer を用いて抽出する。
ゲル組成：変性ポリアクリルアミドゲル（ 10 ％ ）
（ 2 ）
miRNA の抽出
5'リンカー（ MI - 5' linker ）および 3' リンカーがライゲーションされた miRNA は 53 〜 63 mer に泳動される（ 白の破線で囲まれた部分 ）。この領域を切り出し RNA extraction buffer を用いて抽出する。
ゲル組成：変性ポリアクリルアミドゲル（ 10 ％ ）
（ 3 ）
5' リンカーをライゲーションしたmiRNA の抽出
CHO 細胞の全 RNA から単離した miRNA 画分に 3' および 5' リンカーをライゲーションし，RT - PCR を行った。約 60 bp を中心とする部分に miRNA 由来の PCR 産物が確認される。
Lane 1：DynaMarker DNA Low
Lane 2：RT - PCR 産物（ 2μl ）
Lane 3：RT - PCR 産物（ 5μl )
キット内容
- BAP
- Phosphatase buffer
- T4 PNK
- PNK buffer
- ATP
- MI - 5' linker
- MI - 3' linker
- Control RNA（ 21 mer ）
- T4 RNA ligase buffer
- T4 RNA ligase
- RNA loading buffer PA
- dNTPs mixture
- Guide size marker
- PEG solution（ 45 % ）
- RT buffer
- Ligation buffer
- pTAC - 1
- Ligase mixture
- Standard amplification buffer
- Nuclease - free water
- 3' RT primer
- 5' primer
- Glycogen
- Sodium acetate solution
- Gel IndicatorTM RNA staining solution
- RNA extraction buffer
- Reverse transcriptase
- Jet competent cell（ DH5α ）（ #DS310 のみ ）
- Recovery medium（ #DS310 のみ ）
価格
お問い合わせ先（テクニカルサポート 試薬担当）
製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。