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24ウェルまたは96ウェルタイプのBoyden Chamberを用いて，化学物質により誘導される細胞の移動を測定できるキットです。
細胞の移動は血管新生，胚発生，免疫応答，腫瘍細胞の転移，浸潤など様々な過程で中心的な役割を果たします。

特　　長

• 細胞移動に影響を与える物質をスクリーニング，評価できます。
• ハイスループットスクリーニングに適しています。
• 24ウェルタイプの製品は1ウェル内でより多くの細胞を用いて測定を行う際に適しています。
• Cell Migration Assayには細胞外マトリックスとコーティング用のバッファーが含まれないため，任意の細胞外マトリックス／試薬を用いて，アッセイが行えます。
• Endothelial Cell Invasion Assay（#3471-096-K）は血管内皮細胞用にプロトコルが最適化されており，浸潤・遊走の抑制物質としてSulforaphaneが含まれています。

※浮遊細胞には適していません。

測定原理

細胞種による比較

4種類の細胞で10％FBSの有無による24時間後のBasement membrane extractに対する透過率を比較した。MCF-7，NIH3T3は非浸潤型細胞，HT-1080，MDA-MB-231は浸潤型細胞。青い部分が平均値，赤い部分は標準偏差。

キットには，上下2層からなる24/96ウェルタイプのBoyden Chamberが含まれ，上層のTop Chamberはウェル底部がポアサイズ8.0μmのポリエステルメンブレンになっている。メンブレンを透過して移動した細胞を生細胞特異的蛍光染色試薬であるCalcein AM（励起485 nm／蛍光520 nm）で染色し，蛍光強度を測定する。

操作方法概略（96 well Cell Invasion Assayの場合）

1. 細胞を血清飢餓培地で24時間培養する。

2. Extracellular matrix solutionをCoating bufferで希釈し，37℃で4時間以上，CO₂インキュベーター中でインキュベート後，Cell invasion chamberのTop Chamberをコーティングする。

3. 細胞を計数後遠心し，Cell wash bufferで洗浄後，無血清培地に1×10⁶ cells/mlの濃度で再懸濁する。

4. 乾燥を防ぎながらTop Chamber上の余分な水分を吸引し，各ウェルに細胞を播く。

5. Bottom Chamberの各ウェルに培地を入れる。実験条件に応じ適宜評価したい薬剤を添加しておく。

6. Cell invasion chamberを組み立て37℃のCO₂インキュベーター中で24時間インキュベートする。

7. Top Chamberに残された細胞数を算出する。

8. 余分な水分を吸引し，Top ChamberとBottom ChamberをそれぞれCell wash bufferで洗浄する。

9. Cell dissociation solutionとCalcein AMを混合してBottom Chamberに加えCell invasion chamberを再組み立てして37℃のCO₂インキュベーター中で1時間インキュベートする。

10. Top Chamberを取り外し蛍光プレートリーダーで測定する。

11. 標準曲線と細胞数を比較し，移動した細胞の割合を求める。

キット内容

• Cell invasion chamber
• Cell wash buffer
• Cell dissociation solution
• Calcein AM
• Extracellular matrix solution^＊（Cell Invasion Assayのみ）
• Coating buffer（Cell Invasion Assayのみ）
• Sulforaphane（#3471-096-Kのみ）

＊キットにより異なります。
※24または96ウェルプレート対応の蛍光プレートリーダーが必要です。

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