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[CRISPR-Cas9] Cas9 Nickase(D10A)によるゲノム編集ツール PrecisionX Mutant Cas9 SmartNuclease Vector System

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:8198

guide RNAによる新技術のゲノム編集ツール CRISPR-Cas9特集

CRISPR-Cas9システムは、ゲノム中で切断したい領域を切断できる遺伝子改変ツール(ゲノム編集ツール)です。
CRISPR-Cas9を同時に発現するAll-In-Oneベクターに加え、Cas9変異体が組み込まれたベクターが新たに追加されました。

野生型Cas9が組み込まれたAll-in-Oneベクター製品については、「PrecisionX Cas9 SmartNuclease System」をご覧下さい。
RNAの状態で細胞に導入するCas9-CRISPRシステムについては、「PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System」をご覧下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

CRISPR-Cas9とCas9 Nucleaseシステムとは

CRISPR-Cas9システムとは

CRISPR-Cas9システムは、ゲノム中で切断したい領域を切断できる遺伝子改変ツールです。切断したい標的塩基配列を含むguide RNA (crRNA : tracrRNA) とCas9タンパク質により、ゲノム上の任意の配列を切断します。
標的配列のデザインの簡便さや実験手法の容易さから、CRISPRはZFN(Zinc Finger Nuclease)やTALE Nuclease(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)と並び、注目されるゲノム編集(genome editing)技術です。


Cas9 Nuclease(D10A)とは

Cas9の変異体D10Aは、Nickaseとして機能することが報告されています*1。Cas9(D10A)は、野生型Cas9のようにDNA二本鎖を切断せず、一本鎖のみを切断しニックを入れます。そのため、二本鎖切断により引き起こされるDNA修復機構NHEJ(非相同末端再結合)が起こらず、望ましくない領域での遺伝子欠失・挿入やオフターゲット効果を抑制することができます*2。また、最近ではペアのニックにより、細胞株におけるオフターゲット効果を50~1,500倍まで減少できた例が報告されています*3

*1 Jinek, M., et al., Science, 17, 337(6096), 816~821 (2012).
*2 Cong, L., et al., Science, 15, 339(6121), 819~823 (2013).
*3 Ran, F. A., et al., Cell, 12, 154(6), 1380~1389 (2013).

[CRISPR-Cas9] Cas9 Nickaseによるゲノム編集ツール PrecisionX Mutant Cas9 SmartNuclease Vector System

図:標的部位のアンチセンス鎖に対するguide RNA 1とセンス鎖に対するguide RNA 2を作製し、Cas9(D10A)を用いてペアでニックを入れ、ゲノム編集の効率を向上させる。


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特長

  • guide RNA (crRNA:tracrRNA)およびCas9変異体タンパク質は1つのCRISPRベクターから発現できるため、細胞への導入が必要となるCRISPRベクターは1種類のみです。
  • CRISPRベクターは線状化されているため、ライゲーションが容易に行えます。
  • プロモーターの異なる3種類のCRISPRベクターがあります。
  • Cas9(D10A)はNickaseとして機能し、オフターゲット効果を減らした相同組換えによるゲノム編集を行うことができます。特異性を上げるために、double nickingする方法もあります(上記MEMO参照)。
  • Cas9 Double Mutant(D10A、H840A)はヌクレアーゼ活性およびNickase活性がありませんが、標的配列への結合能を有しています。オフターゲット効果の少ない転写リプレッサーとして機能すると考えられており、部位特異的な転写制御の研究への応用が期待されています。

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ベクターマップ

PrecisionX Mutant Cas9 SmartNuclease Vector Systemベクターマップ


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使用例

PrecisionX Mutant Cas9 SmartNuclease Vector System使用例


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キット内容

  • Linearized Cas9-H1 SmartNuclease vector
  • Ligation buffer
  • Fast ligase
  • Fwd Sequencing primer

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価格

[在庫・価格 :2024年04月24日 08時55分現在]

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詳細 商品名
  • 商品コード
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  • 価格
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納期 文献数
Cas9 Nickase: EF1-T7-hspCas9-nickase-H1-gRNA linearized SmartNickase vector(10tests)
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説明文
任意のgRNAおよびCas9 Nickaseを発現するベクターを構築するためのキット。EF1α promoterでCas9を発現。10回使い切り。
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年9月15日号 p.20
ニュース2021年6月15日号 p.10

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任意のgRNAおよびCas9 Nickaseを発現するベクターを構築するためのキット。CAG promoterでCas9を発現。10回使い切り。
法規制等
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掲載カタログ ニュース2022年9月15日号 p.20
ニュース2021年6月15日号 p.10

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任意のgRNAおよびCas9 Nickaseを発現するベクターを構築するためのキット。CMV promoterでCas9を発現。10回使い切り。
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文献数: 0

説明文 任意のgRNAおよびCas9 Nickaseを発現するベクターを構築するためのキット。EF1α promoterでCas9を発現。10回使い切り。
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掲載カタログ ニュース2022年9月15日号 p.20
ニュース2021年6月15日号 p.10

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法規制等
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PrecisionX HR Targeting Vector

切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。

[在庫・価格 :2024年04月24日 08時55分現在]

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piggyBac HR Vector (5'MCS-EF1-GFP-Puro-TK-3'MCS)
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※営利団体・企業(Commercial)にご所属のお客様は,コマーシャルライセンス契約が必要です。 切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。EZ-TAL TALE Assembly KitまたはPrecisionX Cas9 SmartNuclease Systemと組み合わせて使用することにより,ゲノム内に変異の修正や変異の導入を行なうことができる。一旦ゲノムに組み込んだセレクション用のマーカー遺伝子は,PiggyBac Transposaseにより痕跡を残さず除去することが可能。
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年9月15日号 p.28
ニュース2021年6月15日号 p.25

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切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。
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掲載カタログ ニュース2022年9月15日号 p.26
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切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。
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切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。
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掲載カタログ ニュース2022年9月15日号 p.27
ニュース2021年6月15日号 p.27

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切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。
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法規制等
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オリゴ合成受託サービス

「フナコシ オリゴDNA合成受託サービス」のCRISPR-Cas9システム用の注文書をご用意いたしました。
注文書に必要事項をご記入の上、受託・特注品業務担当(jutaku@funakoshi.co.jp)へメールに添付してお送りください。

希釈して直ぐにご使用いただけるように、100μM(蒸留水)に調整し、クローニング用途としてOPCグレードをお勧めします。

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Check it out!

System Biosciences社では、CRISPRベクターの形質転換の際に、形質転換効率が高いコンピテントセル(>1×109 CFUs/μg plasmid)を使用することを推奨しております。

形質転換効率が高いコンピテントセルについては、下記製品の取り扱いがございます。

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。