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System Biosciences, LLC
システムバイオサイエンス / System Biosciences, LLC
[掲載日情報:2015/09/08 現在]

[CRISPR-Cas9] guide RNAによる新技術のゲノム編集ツール PrecisionX Cas9 SmartNuclease System

CRISPR-Cas9システムは,ゲノム中で切断したい領域を切断できる遺伝子改変ツール(ゲノム編集ツール)です。
切断したい標的塩基配列を含むguide RNA (crRNA:tracrRNA) とCas9タンパク質により,ゲノム上の任意の配列を切断します。標的配列のデザインの簡便さや実験手法の容易さから,CRISPRはZFN(Zinc Finger Nuclease)やTALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)と並び,注目されるゲノム編集(genome editing)技術です。

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」の操作法概略

切断したいDNA配列に対する相補的な配列を含むguide RNA,およびその相補鎖を設計し,それらの断片をCRISPRベクターにクローニングします。作成したCRISPR-Cas9発現プラスミドを目的細胞へトランスフェクションすると,CRISPR-Cas9システムにより標的領域が切断されます。

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」の特長

  • guide RNA (crRNA:tracrRNA)およびCas9タンパク質は1つのCRISPRベクターから発現できるため,細胞への導入が必要となるCRISPRベクターは1種類のみです。
  • CRISPRベクターは線状化されているため,ライゲーションが容易に行えます。
  • プロモーターの異なる3種類のCRISPRベクターがあります。
  • 10反応分の量が含まれています。

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」発現プラスミドのベクターマップ

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」発現プラスミドのベクターマップ

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」用の配列のデザイン方法

標的配列は,末端に「GG」が配置されている領域を選択していただき,NGGの上流20塩基で設計します。切断したい標的配列を含むgRNAおよびその相補鎖をオリゴ合成等で作成していただきます。

標的領域5’ NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG 3’
デザインする配列5’ATCCNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 3’
        3’NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCAAA 5’

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ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」の適用例

CRISPR-Cas9システムでの切断後,ゲノムの切断された部分では,塩基の置換や欠損が誘引され,これにより遺伝子のノックアウトができます。また,切断した部位に特定の配列をノックインしたい場合には,その目的配列を含むドナーベクターを一緒にトランスフェクションすると,相同組換えによりその断片をノックインすることができます。

  • 遺伝子のノックイン,ノックアウトへの利用
  • ゲノム中の任意の位置の改変

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」のキット内容

  • Lenearized Cas9 Smart Nuclease vector
  • Ligation buffer
  • Fast ligase
  • Fwd Sequecing primer

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」関連文献

  1. Cong L, Ran FA, Cox D, Lin S, Barretto R, Habib N, Hsu PD, Wu X, Jiang W, Marraffini LA, Zhang F. “Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science, 2013 Feb 15 ;339(6121):819-23. doi: 10.1126/science.1231143. Epub 2013 Jan 3.
  2. Mali P, Yang L, Esvelt KM, Aach J, Guell M, DiCarlo JE, Norville JE, Church GM. RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science, 2013 Feb 15; 339(6121):823-6. doi: 10.1126/science.1232033. Epub 2013 Jan 3.

MEMO

CRISPR-Cas9とは


The recent discovery of the type II prokaryotic CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) system, originally discovered in the bacterium Streptococcus pyogenes that works as a mechanism to defend against viruses and foreign DNA, has provided%; a revolutionary tool for targeted genome engineering with simple elegance. The system uses a nuclease, CRISPR-associated (Cas9), that complexes with small RNAs as guides (gRNAs) to cleave DNA in a sequence-specific manner upstream of the protospacer adaptor motif (PAM) in any genomic location. The CRISPR-Cas9 system is comprised of separate guide RNAs known as the crRNA and tracrRNA. These two separate RNAs have been combined into a single RNA to enable site-specific mammalian genome cutting through the design of a short guide RNA. SBI has built a series of all-in-one CRISPR-Cas9 cloning vectors with different promoter options. These cloning vectors will express a human codon-optimized Cas9 nuclease as well as any gRNA sequence of your choice linked to the tracrRNA. Simply design the gRNA for the genome target DNA sequence and clone into the Cas9 SmartNuclease vector for efficient genome engineering.

[CRISPR-Cas9] guide RNA による新技術のゲノム編集ツールPrecisionX Cas9 SmartNuclease System

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」使用例

[CRISPR-Cas9] guide RNA による新技術のゲノム編集ツールPrecisionX Cas9 SmartNuclease System

Luciferase切断用CRISPRベクターを用いてLuciferase発現293細胞におけるLuciferaseを切断した解析例
CRISPR-Cas9システムを用いてLuciferase切断を標的とするguide RNAを組み込んだCRISPRベクターを作成し,Luciferase発現細胞にトランスフェクションし,切断効果を検証した。Guide RNAは標的配列の異なる2種類’(gRNA1およびgRNA2)を作成した。
A) Luciferase活性測定による検証。Negative controlに対して,gRNA1およびgRNA2ではLuciferase遺伝子の破壊による活性の低下が見られた。
B)Surveyor Assayを行ったところ,gRNA1およびgRNA2においてそれぞれ30%および22%の切断効果が見られた。

[CRISPR-Cas9] guide RNA による新技術のゲノム編集ツールPrecisionX Cas9 SmartNuclease System

Luciferase切断用CRISPRベクターおよびRFPドナーベクターを用いてRFP遺伝子をノックインした解析例
gRNA1およびgRNA2のどちらにおいても切断部分にRFPドナーベクターが組み込まれた。

ゲノム編集ツール「CRISPR-Cas9システム」の価格

[在庫 : 2016年06月30日 23時00分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
SBIシステムバイオサイエンス
System Biosciences, LLC

CAS700A-1

EF1-T7-hspCas9-H1-gRNA linearized SmartNuclease vector(10tests)

1kit

\131,000
(未発注)
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SBIシステムバイオサイエンス
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CAS720A-1

CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA linearized SmartNuclease vector(10tests)

1kit

\131,000
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CAS740A-1

CMV-T7-hspCas9-H1-gRNA linearized SmartNuclease vector(10tests)

1kit

\131,000
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EF1-T7-hspCas9-H1-gRNA linearized SmartNuclease vector(10tests)

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CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA linearized SmartNuclease vector(10tests)

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CAS740A-1

CMV-T7-hspCas9-H1-gRNA linearized SmartNuclease vector(10tests)

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■コントロール

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データシート

CAS605A-1

Cas9 SmartNuclease AAVS1 Positive Control Kit

1kit

\281,000
(未発注)
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データシート

CAS601A-1

Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA Targeting vector, EF1a Promoter

10μg

\168,000
(未発注)
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[在庫 : 2016年06月30日 23時00分 現在]
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CAS605A-1

Cas9 SmartNuclease AAVS1 Positive Control Kit

1kit

\281,000
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保存条件-20℃,液窒法規制等カルタヘナ該当品
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ニュース 2014年5月1日号 p.20
ニュース 2014年2月1日号 p.16

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PrecisionX Cas9 SmartNuclease System

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CAS601A-1

Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA Targeting vector, EF1a Promoter

10μg

\168,000
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Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
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ニュース 2014年5月1日号 p.20
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■PrecisionX HR Targeting Vector

切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。

[在庫 : 2016年06月30日 23時00分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
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PBHR100A-1

piggyBac HR Vector (5'MCS-EF1-GFP-Puro-TK-3'MCS)

10μg

\202,000
(未発注)
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データシート

HR100PA-1

Basic HR Targeting Vector for Gene Knock-In/Out [MCS1-LoxP-MCS2-MCS3-pA-LoxP-MCS4]

10μg

\140,000
(未発注)
追加
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データシート

HR110PA-1

Gene Knock-Out HR Targeting Vector [MCS1-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-MCS2]

10μg

\153,000
(未発注)
追加
SBIシステムバイオサイエンス
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データシート

HR120PA-1

GFP-Fusion HR Targeting Vector [GFP-pA-LoxP-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS]

10μg

\153,000
(未発注)
追加
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データシート

HR130PA-1

T2A-GFP Co-Expression HR Targeting Vector [T2A-GFP-pA-loxP-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS]

10μg

\153,000
(未発注)
追加
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データシート

HR150PA-1

GFP-T2A-Luciferase Co-Expression HR Targeting Vector [GFP-T2A-Luc-pA-loxP-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS]

10μg

\153,000
(未発注)
追加
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データシート

HR180PA-1

IRES-GFP Co-Expression HR Targeting Vector [IRES-GFP-pA-loxP-MCS1-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS2]

10μg

\153,000
(未発注)
追加
[在庫 : 2016年06月30日 23時00分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
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PBHR100A-1

piggyBac HR Vector (5'MCS-EF1-GFP-Puro-TK-3'MCS)

10μg

\202,000
(未発注)
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説明文

切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。EZ-TAL TALE Assembly KitまたはPrecisionX Cas9 SmartNuclease Systemと組み合わせて使用することにより,ゲノム内に任意の配列を組み込むことができる。一旦ゲノムに組み込んだ配列は,PiggyBac Transposaseにより痕跡を残さず除去することが可能。 ※購入時にSBI社専用の「使用目的確約書」が必要です。

保存条件-20℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

ニュース2016年4月15日 p.12
ニュース 2015年2月15日号 p.20

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EZ-TAL TALE Assembly Kit
PrecisionX Cas9 SmartNuclease System
PiggyBac Genome Engineering HR Vector
PrecisionX Mutant Cas9 SmartNuclease Vector System

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HR100PA-1

Basic HR Targeting Vector for Gene Knock-In/Out [MCS1-LoxP-MCS2-MCS3-pA-LoxP-MCS4]

10μg

\140,000
(未発注)
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説明文

切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。

保存条件-20℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

ニュース 2015年2月15日号 p.16

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PrecisionX Cas9 SmartNuclease System
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Gene Knock-Out HR Targeting Vector [MCS1-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-MCS2]

10μg

\153,000
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切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。

保存条件-20℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

ニュース 2015年2月15日号 p.16

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PrecisionX Cas9 SmartNuclease System
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GFP-Fusion HR Targeting Vector [GFP-pA-LoxP-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS]

10μg

\153,000
(未発注)
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説明文

切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。

保存条件-20℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

ニュース 2015年2月15日号 p.17

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EZ-TAL TALE Assembly Kit
PrecisionX Cas9 SmartNuclease System
PrecisionX HR Targeting Vector
PrecisionX Mutant Cas9 SmartNuclease Vector System

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HR130PA-1

T2A-GFP Co-Expression HR Targeting Vector [T2A-GFP-pA-loxP-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS]

10μg

\153,000
(未発注)
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切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。

保存条件-20℃法規制等
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ニュース 2015年2月15日号 p.17

製品記事

EZ-TAL TALE Assembly Kit
PrecisionX Cas9 SmartNuclease System
PrecisionX HR Targeting Vector
PrecisionX Mutant Cas9 SmartNuclease Vector System

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HR150PA-1

GFP-T2A-Luciferase Co-Expression HR Targeting Vector [GFP-T2A-Luc-pA-loxP-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS]

10μg

\153,000
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切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。

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PrecisionX Cas9 SmartNuclease System
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HR180PA-1

IRES-GFP Co-Expression HR Targeting Vector [IRES-GFP-pA-loxP-MCS1-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS2]

10μg

\153,000
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切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。

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PrecisionX HR Targeting Vector
PrecisionX Mutant Cas9 SmartNuclease Vector System

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オリゴ合成受託サービス

「フナコシ オリゴDNA合成受託サービス」のCRISPR-Cas9システム用の注文書をご用意いたしました。
注文書に必要事項をご記入の上,受託・特注品業務担当(jutaku@funakoshi.co.jp)へメールに添付してお送りください。

希釈して直ぐにご使用いただけるように,100μM(蒸留水)に調整し,クローニング用途としてOPCグレードをお勧めします。

コンピテントセル

Giga Competent Cell (DH5α)

System Biosciences社では,CRISPRベクターの形質転換の際に,形質転換効率が高いコンピテントセル(>1×109 CFUs/μg plasmid)を使用することを推奨しております。

形質転換効率が高いコンピテントセルについては,下記製品の取り扱いがございます。

ギガ(109)レベルの形質転換効率!『Giga Competent Cell (DH5α)』

抗mycタグ抗体

Cas9タンパク質にはmycタグが付加するため,抗mycタグ抗体を使用してCas9タンパク質を検出できます。

抗mycタグ抗体の検索はこちら。

Cas9の検出

お問い合わせ先(テクニカルサポート 試薬担当)

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。

表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

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