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ジブロモチロシン測定ELISAキット Dibromo-tyrosine ELISA Kit

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:65138

試料中のジブロモチロシンを競合法により比色定量するELISAキットです。
ジブロモチロシンは炎症、アレルギーに関連した組織障害の新しいバイオマーカーとして期待されています。

ジブロモチロシン(Dibromotyrosine)とは

ジブロモチロシンは、好酸球ペルオキシダーゼ(Eosinophil Peroxidase, EPO)によりチロシン残基に臭素(Br)が結合して産生される酸化損傷生成物です。好酸球が活性化すると、呼吸バーストが発生し酸素と過酸化水素濃度が上昇します。EPOは過酸化水素を利用して血漿中の臭素を過酸化し、次亜臭素酸 hypobromous acid (HOBr)を発生させます。 これにより、チロシンからジブロモチロシンが生成します。
好酸球は外部から侵略があるとその部位に集結します。また、EPO活性はぜんそく、がん、アレルギー性疾患において上昇することが知られています。したがって、3,5-ジブロモチロシンなどの臭素化合物は、in vivo における好酸球由来の組織障害のバイオマーカーとして有用と考えられており、本製品はがん研究のほか、細胞情報伝達、酸化ストレス、翻訳後修飾(PTM)関連研究などに有用です。

チロシンの臭素化イメージ

チロシンの臭素化



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特長

  • 測定試料:血漿、尿
  • 測定範囲:0.078~5μg/ml
  • 感度:0.04μg/ml
  • 測定波長:450 nm
  • インキュベーション時間:1時間

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標準曲線の例

ジブロモチロシンELISAキットの標準曲線

ジブロモチロシンELISAキットの標準曲線

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使用例

ヒト尿を用いた添加(Spike-in)試験

ヒト血漿を用いた添加(Spike-in)試験

喫煙者かつ糖尿病患者と、非喫煙で健常なヒトの血漿を用いた比較

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操作方法概略

  1. 試料および標準希釈液で標準および試料を準備する。
  2. 50μlの調製済み標準液と試料を3回ずつ適切なウェルに加える。
  3. 50μlの希釈したジブロモ-チロシン-ビオチン抗体をウェルに加える。
  4. プレートをプレートカバーで覆い、37℃で1時間インキュベートする。
  5. ash Bufferでプレートを4回洗浄する。
  6. 各ウェルに100μlのストレプトアビジン-HRPワーキングソリューションを追加する。
  7. プレートをプレートシーラーで覆い、室温で30分間インキュベートする。
  8. Wash Bufferでプレートを4回洗浄する。
  9. 各ウェルに100μlのTMB基質を追加する。
  10. プレートを暗所、室温(20~25℃)で30分間静置する。
  11. 各ウェルに100μlのStop Solutionを加えて反応を停止させる。
  12. プレートリーダーで450 nmの吸光度を測定する。

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キット内容

  • Dibromo-tyrosine: BSA coated plate
  • Dibromo-tyrosine standard
  • Dibromo-tyrosine: Biotin conjugated monoclonal antibody
  • Streptavidin Poly HRP concentrate
  • Streptavidin Poly HRP diluent
  • Sample and standard diluent (Red)
  • Dibromo-tyrosine antibody diluent (Blue)
  • Wash Buffer concentrate
  • TMB substrate
  • Stop solution
  • Plate covers

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参考文献

  1. MacPherson, J. C., Comhair, S. A. A., Erzurum, S. C., et al., J. Immun., 166, 5763~5772 (2001).
  2. Mayeno, A. N., Curran, A. J., Roberts, R. L. et al., J. Biol. Chem., 264, 5660~5668 (1989).
  3. Babior, B. M., N. Engl. J. Med., 298, 659~668 (1978).
  4. Wu W., Chen, Y., d’Avignon, A. et al., Biochem., 38, 3538~3548 (1999).
  5. Kambayashi, Y., Ogino, K., Takemoto, K. et al., J. Clin. Biochem. Nutr., 44, 95~103 (2009).
  6. Wang J., Slungaard A., Arch. Biochem. Biophys., 445, 256~260 (2006).
  7. Kazura, J. W., Fanning, M. M., Blumer, J. L. Mahmoud, A. A., J. Clin. Invest., 67, 93 (1981).
  8. Klebanoff, S. J., Locksley, R. M., Jong, E. C., Rosen, H., CIBA Found. Symp., 99, 92 (1983).
  9. Gleich, G. J., Ottesen, E. A., Leiferman, K. M., Ackerman, S. J., Int. Arc. Allergy Appl. Immunol., 88, 59 (1989).
  10. Wardlaw, A. J., Postgrad. Med. J., 70, 536 (1994).

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価格

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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