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BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)
バイオダイナミクス / BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)
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[掲載日情報:2017/01/24 現在]

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)を簡単に調製できます Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)

特許申請中の新技術であるNicking酵素法によって,高い純度で正確な配列を有する長鎖の一本鎖DNA(ssDNA, 1,500 baseまたは3,000 base)を調製できるキットです。

Long ssDNA Preparation Kit本体の価格表はこちら。
Denaturing Gel-Loading Bufferの価格表はこちら。

本製品にはゲルからの抽出キットは含まれておりません。
本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。

MEMO

ssDNAの調製について


ssDNAは,種々の目的に使用されてきましたが,その調製にはPCRや合成DNAオリゴマーの使用,エキソヌクレアーゼ反応,逆転写酵素反応などの工程があることから,内部の変異や末端の欠失を生じることは避けられませんでした。また,精製には変性アクリルアミドゲル電気泳動やストレプトアビジン被覆常磁性ビーズなどが用いられてきましたが,大量のdsDNAの混入が指摘される場合もありました。
Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)は,簡単な操作によって,高い純度で目的の配列を有する長鎖のssDNAを取得することができます。

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)調製キットの特長

  • 変異や末端の欠失を含まない,1,500 baseまたは3,000 baseまでの長鎖ssDNAが調製できます。
  • 全操作は,一般的なdsDNA断片の調製法とほぼ同じで,特別な機器や試薬は必要ありません。
  • 添付のDenaturing Gel-loading Bufferで変性させることにより,目的の長鎖ssDNAを通常のアガロースゲル電気泳動で分離精製することができます。
  • ゲル電気泳動をモニターするために有用なインディケーターとして着色済RNA分子量マーカー(Prestain Marker for RNA HighDynaMarker®)が添付されています。

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)調製用のプラスミドマップ

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)を調製するキットのプラスミドマップ #DM610 長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)を調製するキットのプラスミドマップ #DM620
⇒DS610のベクターシークエンス情報 ⇒DS620のベクターシークエンス情報

sequence ファイルにはパスワード(Access ID)が設定されております。製品の箱に記載されているAccess IDをご入力ください。以前に購入された方でAccess IDがついていない場合にはお問い合わせください。

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)調製キットの原理および操作方法

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)を調製するキットの原理および操作方法
  1. 目的のDNA断片を添付のプラスミドのMCSの2つのNicking酵素サイトの間,あるいはNicking酵素サイトと制限酵素サイトの間にクローニングします。
  2. そのプラスミドを,クローニングに用いたサイトで,対応するNicking酵素や制限酵素を用いて消化します。
  3. 消化したプラスミドは,Denaturing Gel-loading Bufferで変性させた後,通常のアガロースゲル電気泳動を行います。
  4. 先頭のバンドを切り出し抽出,精製するだけで目的のssDNAが得られます。

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)調製キットの使用例

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)を調製するキットの使用例

Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)で調製した1,500 baseと3,000 baseの長鎖ssDNA

目的のdsDNA断片 (1,500 bpまたは3,000 bp)をpLSODN-1又はpLSODN -3のMCS(Nt.BspQIサイト と Nb.BsrDIサイト間)にクローニングした。これをNicking酵素(Nt.BspQIと Nb.BsrDI)で処理することで目的断片の両端にニックを導入した。変性後,試料をアガロースゲル電気泳動で分離し,目的のバンドからDNAを抽出,精製した。いずれの試料もDenaturing Gel-loading Bufferによって変性後,電気泳動を行っている。

Lane 1:1,500 bp DNA断片を導入したpLSODN-1を,Nicking酵素で処理した試料
Lane 2:精製した長鎖ssDNA (1,500 base)
Lane 3:3,000 bp DNA断片を導入したpLSODN-3を,Nicking酵素で処理した試料
Lane 4::精製した長鎖ssDNA (3,000 base)

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)を調製するキットの使用文献

ssODN-mediated knock-in with CRISPR-Cas for large genomic regions in zygotes
Yoshimi K, Kunihiro Y, Kaneko T, Nagahora H, Voigt B, Mashimo T. Nature Communications.Jan;20;7:10431 (2016).

Nicking酵素法(本製品)にて調製した長鎖ssDNA(2A peptide配列とGFP全域の配列,5’ 側300 base homology arm,3’ 側60 base homology armを含む全長1,194 baseの相補鎖側ssDNA)とpoly(A)を付与したCas9-poly(A)RNA,ガイドRNA: Thy1-TGAをラット受精卵へマイクロインジェクションすることによって,ラットrThy1遺伝子C末端に,高い効率(11.1%)でGFP遺伝子全域をノックインすることに成功した。この論文は,長鎖ssDNAを用いたlsODN法 (ssODNに対してlsODN)によって,外来遺伝子全長のノックイン効率を高めることができることを示した初めての報文である。

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)調製キットのキット内容

  • Plasmid
  • Denaturing gel-loading buffer
  • Prestain marker for RNA highDynaMarker®

本製品をご購入の際は,専用の使用目的確約書が必要です。
使用目的確約書に必要事項をご記入の上,当社受託・特注品業務担当までFAX(03-5684-6539)でお送り下さい。
本製品または本技術の商用利用に関しては,当社受託・特注品業務担当(jutaku@funakoshi.co.jp, TEL:03-5684-1645 )までお問い合わせ下さい。本製品を用いて製造した産物(遺伝子改変マウス等)の販売や,第三者へのサービス提供等の目的で本製品を使用される予定の場合にも,あらかじめお問い合わせ下さい。

長鎖の一本鎖DNA(ssDNA)調製キットの価格

[在庫・価格 : 2017年09月21日 14時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

データシート

DS610

Long ssDNA Preparation Kit for 1.5kb (LsODN Preparation Kit)

1kit

\40,0002個以上追加
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

データシート

DS620

Long ssDNA Preparation Kit for 3.0kb (LsODN Preparation Kit)

1kit

\40,0002個以上追加
[在庫・価格 : 2017年09月21日 14時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

DS610

Long ssDNA Preparation Kit for 1.5kb (LsODN Preparation Kit)

1kit

\40,0002個以上追加
説明文

※使用目的確約書が必要。

保存条件-80℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

製品記事

Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)

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Long ssDNA Preparation Kit for 3.0kb (LsODN Preparation Kit)

1kit

\40,0002個以上追加
説明文

※使用目的確約書が必要。

保存条件-80℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

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Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)

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Denaturing Gel-Loading Bufferの価格

[在庫・価格 : 2017年09月21日 14時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

DS611

Denaturing Gel-Loading Buffer

5x1ml

\30,0002個以上追加
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

DS612

Denaturing Gel-Loading Buffer

2x1ml

\15,0002個以上追加
[在庫・価格 : 2017年09月21日 14時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

DS611

Denaturing Gel-Loading Buffer

5x1ml

\30,0002個以上追加
説明文

別包装品あり

保存条件-20℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

製品記事

Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)

関連記事

BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

DS612

Denaturing Gel-Loading Buffer

2x1ml

\15,0002個以上追加
説明文

別包装品あり

保存条件-20℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

製品記事

Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)

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[在庫・価格 : 2017年09月21日 14時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

データシート

DM260

DynaMarker, Prestain Marker for RNA High

180μl

\25,000
キャンペーン
\15,000
2個以上追加
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

データシート

DM122

DynaMarker, DNA High D

1set

\15,0002個以上追加
[在庫・価格 : 2017年09月21日 14時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
BDLバイオダイナミクス
BioDynamics Laboratory Inc.(株式会社バイオダイナミクス研究所)

DM260

DynaMarker, Prestain Marker for RNA High

180μl

\25,000
キャンペーン
\15,000
2個以上追加
説明文

着色済みのRNA分子量ラダーマーカー(Prestain RNA Ladder Marker)。約30回分。

保存条件-80℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

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DynaMarker(R) Prestain Ladder Marker for RNA
Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)
DynaMarker(R) High RNAラダーマーカーシリーズ

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DM122

DynaMarker, DNA High D

1set

\15,0002個以上追加
説明文

DNA分子量ラダーマーカー(DNA Ladder Marker)。Ready-to-LoadのDNA分子量マーカー。300~10,000 bp。6×BPB loading dye(1 ml)添付。容量:1 ml(5~10μl/lane)。容量:1 ml(5~10μl/lane)

保存条件-20℃法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

ニュース2016年11月15日号 p.32

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