最新のゲノム広域スクリーニングとCas9細胞株樹立システム AAVS1 Safe Harbor Targeting System with Cas9
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：64619
AAVS1 Safe Harbor Targeting System with Cas9は、表現型への影響がなく安全な遺伝子領域として知られるAAVS1 Safe Harbor Siteを利用して任意の目的遺伝子またはCas9遺伝子のknock-inを簡便かつ確実に行えるベクターおよびキットです。
左：AAVS1 Safe Harbor Targeting Systemを用いて作製した HEK293細胞株各クローンのqPCRによるAAVS1遺伝子座におけるCas9遺伝子の発現量解析
右：高発現クローン#8と#17のSurveyor Assayの結果
HEK293細胞株のAAVS1 locusにAAVS1 Safe Harbor Targeting Systemを用いて、Cas9遺伝子を導入した。矢印（←）のバンドはCas-9による切断を示す。Cas9が形質導入されていないコントロール293細胞には、このバンドが存在しないことがわかる。
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- Safe Harborとは
- 特長
- 製品の種類
- ベクターマップ
- キット内容
- キット別売品
- 関連製品：First generation AAVS1 HR Donor Vectors
- Vector単品の価格
- キットの価格
Safe Harborとは
様々な細胞で転写活性を有し、かつその領域に遺伝子導入を行ってもフェノタイプに影響を及ぼさない遺伝子領域としてSafe Harborが知られています。ゲノムに外来遺伝子を導入する際に、遺伝子導入による影響や導入遺伝子の発現に影響が生じないようにSafe Harborを標的として利用する手法が確立されています。
2011年、Sadelainらは、ヒト19番染色体上のAAVS1遺伝子（別名PPP1R12C遺伝子）を標的としたguide RNAを設計し、ヒトES細胞やiPS細胞においてこれらの遺伝子を欠損させても細胞が多能性を保持することが報告しました。AAVS1遺伝子は、HEK293、K562、HeLa、DU-145、Hep3Bなどの細胞株において転写活性を有することから、Safe Harborとして利用可能な標的領域とされています。すでにヒトのESCおよびiPS細胞において、AAVS1遺伝子領域に特異的なヌクレアーゼ、GFPまたは抗生物質選択マーカーを保有するドナープラスミドを用いた相同組換えにより、AAVS1遺伝子座の標的化が実証されています。
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特長
- 任意の遺伝子をAAVS1 Safe Harbor領域に正確にknowck-inできます。
- 導入遺伝子は、細胞において恒常的に発現します。
- 同質遺伝子細胞株を簡便に構築できます。
- off-targetの遺伝子導入を最小化できます。
- 全てのAAVS1 Safe Harbor Targeting Donor Vectorは、AAVS1に特異的なgRNAおよびPresisionX- Cas9 SmartNucleaseを組み込んだAAVS1 gRNA/Cas9 SmartNuclease Plasmid（#CAS601A-1）と併用でき、細胞にco-transfectionするだけで共発現できます。
- hspCAS9 AAVS1 Safe Harbor Knock-in Donor（#CAS620A-1)は、CRISPR/ Cas9ライブラリーの効率的なスクリーニングに有用です。
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製品の種類
AAVS1 Safe Harbor Donor Vectorsは、使用目的に応じて4種類あります。下図に示すように、使用目的に応じて異なるAAVS1標的部位と、その上流および下流に約800 bpの共通する部位より構成されています。
※ 商品コードをクリックすると価格表がご覧いただけます。
| Homologous Upstream site |
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| Heterologous AAVS1 targeting site | 品 名 | 商品コード | 使用目的 | |
|---|---|---|---|---|
| Vector単品 （包装） | Kit | |||
 | AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0, All-Purpose Donor (AAVS1-SA-puro-MCS) | GE620A-1 （10μg） | GE620A-KIT | 任意のプロモーターと目的遺伝子を組み込む。 |
 | AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0, GOI Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-MCS) | GE622A-1 （10μg） | GE622A-KIT | EF1プロモーター制御下に目的遺伝子を組み込む。 |
 | AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0, Reporter Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-MCS-GFP) | GE624A-1 （10μg） | GE624A-KIT | 任意のプロモーターを組み込み、レポーター（GFP）遺伝子の発現を確認する。 |
 | hspCas9 AAVS1 Safe Harbor Knock-in-Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9) | CAS620A-1 （10μg） | CAS620A-KIT | Safe Harbor Targeting Systemを用いて、簡便かつ正確にCRISPR/Cas9をknock-inする*。 |
| Homologous Downstream site |
 |
* AAVS1部位にCRISPR/Cas9を組み込み、HEK293細胞株で恒常発現するStable Cas9 HEK293 Cell Line (#CAS630A-1)もあります。
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ベクターマップ
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■AAVS1 Donor Vector
| 品 名 | 商品コード | ベクターマップ |
|---|---|---|
| AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0, All-Purpose Donor (AAVS1-SA-puro-MCS) | GE620A-1 |
 |
| AAVS1-SA-puro-EF1-MCS | GE622A-1 |
 |
| AAVS1-SA-puro-MCS-GFP | GE624A-1 |
 |
| AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9 | CAS620A-1 |
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キット内容
※ 商品コードをクリックすると価格表がご覧いただけます。
| 品 名 | キット 商品コード | AAVS Safe Harbor Donor Vector | Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA Targeting Vector | Junction PCR Primer Mix | Cas9 RT-PCR Primer Sets |
|---|---|---|---|---|---|
| CAS601A-1 | GE640PR-1 | GE603PR-1 | |||
| AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0, All-Purpose Donor (AAVS1-SA-puro-MCS), Complete Kit | GE620A-KIT | GE620A-1 | ● | ● | － |
| AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0, GOI Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-MCS) | GE622A-KIT | GE622A-1 | ● | ● | － |
| AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0, Reporter Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-MCS-GFP) | GE624A-KIT | GE624A-1 | ● | ● | － |
| hspCas9 AAVS1 Safe Harbor Knock-in-Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9) | CAS620A-KIT | CAS620A-1 | ● | ● | ● |
| キットコンポーネントの主要用途 | AAVS1 Donor Vector | AAVS-gRNAを標的とするヌクレアーゼ | AAVS1またはCas9の組み込み部位の確認用 | Cas9発現確認用 | |
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キット別売品
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■Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA Targeting Vector（#CAS601A-1）
AAVS1に特異的なgRNAおよびPresisionX- Cas9 SmartNucleaseを組み込んだプラスミドベクターです。全てのSafe Harbor Donor Vectorと併用可能で、細胞にco-transfectionするだけで共発現することができます。
Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA Targeting Vector（#CAS601A-1）のベクターマップ
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関連製品：First generation AAVS1 HR Donor Vectors
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■AAVS1 Safe Harbor cDNA/miRNA Donor Vector (pAAVS1D-PGK.MSC-Ef1α.copGFPpuro)（#GE602A-1）
AAVS1領域で相同組換えを起こすためのドナーベクターです。MCSに目的遺伝子を組み込んで使用します。
■AAVS1 Safe Harbor cDNA/miRNA Donor Vector (pAAVS1D-PGK.MSC-Ef1α.copGFPpuro)（#GE603A-1）
RFP遺伝子を含むAAVS1領域で相同組換えにおけるポジティブコントロールHRドナーベクターです。EF1αプロモーター制御下にGFPとPuromycinのマーカー遺伝子も組み込まれています。
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Vector単品の価格
[在庫・価格 ：2024年04月25日 15時15分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||
|---|---|---|---|---|---|
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AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0 - All-Purpose Donor (AAVS1-SA-puro-MCS) |
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0 | |||
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AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0 - GOI Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-MCS) |
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0 | |||
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AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0 - Reporter Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-MCS-GFP) |
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0 | |||
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hspCas9 AAVS1 Safe Harbor Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9) |
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0 | |||
[在庫・価格 ：2024年04月25日 15時15分現在]
AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0 - All-Purpose Donor (AAVS1-SA-puro-MCS)
文献数： 0
- 商品コード：GE620A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥247,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0 - GOI Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-MCS)
文献数： 0
- 商品コード：GE622A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥247,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0 - Reporter Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-MCS-GFP)
文献数： 0
- 商品コード：GE624A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥247,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
hspCas9 AAVS1 Safe Harbor Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9)
文献数： 0
- 商品コード：CAS620A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥242,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
追加しました。
キットの価格
[在庫・価格 ：2024年04月25日 15時15分現在]
| 詳細 | 商品名 |
|
文献数 | ||
|---|---|---|---|---|---|
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AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0 - All-Purpose Donor (AAVS1-SA-puro-MCS), Complete Kit with CAS601A-1, GE640PR-1 |
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0 | |||
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AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0- GOI Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-MCS), Complete Kit w/CAS601A-1, GE640PR-1 |
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AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0-Reporter Knock-in Donor(AAVS1-SA-puro-MCS-GFP), Complete Kit w/CAS601A-1, GE6... |
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0 | |||
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hspCas9 AAVS1 Safe Harbor Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9), Complete Kit with CAS601A-1, CAS640PR-1, CAS9-PR-1 |
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0 | |||
[在庫・価格 ：2024年04月25日 15時15分現在]
AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0 - All-Purpose Donor (AAVS1-SA-puro-MCS), Complete Kit with CAS601A-1, GE640PR-1
文献数： 0
- 商品コード：GE620A-KIT
- メーカー：SBI
- 包装：1kit
- 価格：¥444,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0- GOI Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-MCS), Complete Kit w/CAS601A-1, GE640PR-1
文献数： 0
- 商品コード：GE622A-KIT
- メーカー：SBI
- 包装：1kit
- 価格：¥444,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
AAVS1 Safe Harbor Targeting Vector 2.0-Reporter Knock-in Donor(AAVS1-SA-puro-MCS-GFP), Complete Kit w/CAS601A-1, GE6...
文献数： 0
- 商品コード：GE624A-KIT
- メーカー：SBI
- 包装：1kit
- 価格：¥444,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
hspCas9 AAVS1 Safe Harbor Knock-in Donor (AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9), Complete Kit with CAS601A-1, CAS640PR-1, CAS9-PR-1
文献数： 0
- 商品コード：CAS620A-KIT
- メーカー：SBI
- 包装：1kit
- 価格：¥448,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
追加しました。
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