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qPCRによりクロマチン状態(ユークロマチン・ヘテロクロマチン)を解析するキット EpiQuik Chromatin Accessibility Assay Kit

掲載日情報:2020/04/02 現在Webページ番号:63452

qPCRにより、標的遺伝子配列を含むクロマチンの状態(ユークロマチンまたはヘテロクロマチン)を解析するための試料調製用キットです。キットには細胞・組織試料の溶解、クロマチンの抽出・消化、DNA精製用の試薬が含まれています。

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クロマチン接近可能性(アクセシビリティ)について

クロマチン接近可能性(アクセシビリティ)について





クロマチンの調節要素のアクセシビリティは、遺伝子調節の多くの側面にとって重要です。調節エレメント上に配置されたヌクレオソームは、転写因子のDNAへのアクセスを阻害します。クロマチンと転写因子間の相互作用の役割を解明するには、ゲノムに沿って配置されたヌクレオソームのマッピングを通してクロマチンのアクセシビリティを決定することが重要です。一般に、クロマチンが凝縮するほど、転写因子や他のDNA結合タンパク質がDNAへアクセスし、タスクを実行することが難しくなります。DNAにアクセスしやすいほど、周辺の遺伝子が活発に転写される可能性が高くなります。ヌクレオソームの存在(または不在)は、直接または間接的に、組換え、複製、セントロメア形成、DNA修復など、他の様々な細胞および代謝プロセスに影響を与えます。

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特長

  • 細胞・組織の溶解から、qPCR用のDNA精製まで迅速(約1時間30分)に操作が行えます。
  • 迅速なプロトコルにより、核へのダメージや、解離したクロマチン構成因子の損失を最小限に抑え、クロマチンの状態を保てます。
  • キットには、ユークロマチンまたはヘテロクロマチンを解析するためのヒト用のコントロールプライマーが含まれています。ヒト試料でのクロマチンDNAの消化が適切に行われたかの判断に有用です。
  • ハイスループット反応にも適用します。
  • 測定試料:哺乳動物組織(新鮮/凍結)、培養細胞
  • 必要試料量:細胞 1×105~2×106(最適量:0.5×106)、組織 2~40 mg(最適量:10 mg)

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操作方法概略

EpiQuik Chromatin Accessibility Assay Kitの操作方法概略

ヌクレアーゼで処理および未処理の抽出クロマチンからDNAを精製し、標的遺伝子に対するプライマーを用いてqPCRを行います。
標的遺伝子を含むクロマチンが、転写因子や他のDNA結合タンパク質と接近可能な場合(ユークロマチン)は、ヌクレアーゼにより消化されてqPCRでCt値は大きくシフトします。
一方、接近可能性が低い場合(ヘテロクロマチン)では、ヌクレアーゼにより消化されず、消化・未消化試料間で優位なCt値のシフトは見られません。




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使用例

本製品を用いてMDA-231細胞からクロマチンを単離・DNAを抽出し、キットに含まれるPositiveまたはNegative control primeを用いてqPCRを行った。qPCRはEpiQuik Quantitative PCR Fast Kit(#P-1029)を用いて行った。

EpiQuik Chromatin Accessibility Assay Kitの使用例1

ユーククロマチンの解析

線:ヌクレアーゼ未処理、線:ヌクレアーゼ処理





EpiQuik Chromatin Accessibility Assay Kitの使用例2

ヘテロクロマチンの解析

MDA-231細胞で恒常的に抑制された遺伝子のプロモーター領域について、negative control primerを用いて増幅し解析した。Ct値の差は<1.5 cylceとなった。
線:ヌクレアーゼ未処理、線:ヌクレアーゼ処理

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キット内容

  • Lysis buffer
  • Wash buffer
  • Protease inhibitor cocktail
  • Nuclear digestion buffer
  • Nuclease mix
  • Reaction stop solution
  • Proteinase K
  • DNA binding solution
  • DNA washing solution
  • Elution solution
  • Positive control primer
  • Negative control primer
  • F-spin column
  • F-collection tube

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価格

[在庫・価格 :2024年03月29日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
EpiQuik Chromatin Accessibility Kit (48 assays)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 15
説明文
法規制等
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年11月1日号 p.21
ニュース2021年3月15日号 p.20

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[在庫・価格 :2024年03月29日 00時00分現在]

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EpiQuik Chromatin Accessibility Kit (48 assays)

文献数: 15

説明文
法規制等
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年11月1日号 p.21
ニュース2021年3月15日号 p.20

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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