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PCR用ポジティブコントロール PCRChecker

掲載日情報:2015/08/05 現在Webページ番号:63022

PCRにおいて、実験操作やサイクルプログラムおよびサーマルサイクラーの動作に不具合がないかを確認できる、ポジティブコントロールです。鋳型DNA、プライマー、酵素、dNTPミックスが全て1チューブに調製済みのReady-to-useフォーマットです。

PCR用ポジティブコントロール PCRCheckerの特長

  • PCRCheckerは、通常使用されるほぼ全てのサイクルプログラムで増幅するため、ユニバーサルポジティブコントロールとして使用できます(下記「確認済み増幅条件」参照)。増幅産物は約500 bpです。
  • PCRで目的配列の増幅が見られなかった場合、原因が試薬の入れ忘れやサイクルプログラムの条件設定、サーマルサイクラーの不具合によるものかどうかを確認できます。
  • Ready-to-useフォーマットのため、そのままPCRチューブやプレートのウェルに添加するだけで使用できます。
  • PCRCheckerはReady-to-useでほぼ全てのサイクルプログラムで増幅するため、学生実習でも有用です。

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PCR用ポジティブコントロール PCRCheckerの確認済み増幅条件

反応液:50μlの場合

Initial Heating:
(サイクル前熱変性)
・94~95℃, for 30 sec to 15 min
・96℃, for 10 sec to 2 min
・97~98℃, for 10 sec
Denaturing step:
(熱変性)
・94~95℃, for 20 sec to 60 sec
・96℃, for 10 sec to 30 sec
・97~98℃, for 10 sec
Annealing step:
(アニーリング)
・45~68℃, for 15 sec to 2 min
Extension step:
(伸長)
・60~75℃, for 30 sec to 15 min
Cycle #
(サイクル数):
・from 15 to 30
PCR用ポジティブコントロール PCRChecker ユニバーサルポジティブコントロール

各種条件でPCRを行ったPCRCheckerのアガロースゲル電気泳動像(0.8%アガロースゲル、1×TAE buffer)

Lane 1: DynaMarker for Plasmid D
Lane 2: PCRChecker, no-amplification control
Lane 3: Annealing at 45℃
Lane 4: Annealing at 50℃
Lane 5: Annealing at 55℃
Lane 6: Annealing at 60℃
Lane 7: Annealing at 65℃
Lane 8: Annealing at 68℃
Lane 9: Extention at 62℃
Lane 10: Extention at 75℃
Lane 11: Extention for 2 min
Lane 12: Extention for 5 min
Lane 13: Extention for 10 min
Lane 14: Long time denature
Lane 15: Annealing for 15 sec
Lane 16: Two-step PCR
Lane 17: Short time denature at 95℃

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PCR用ポジティブコントロール PCRCheckerの操作方法概略

PCR用ポジティブコントロール PCRChecker 操作方法 1) PCRChecker 50μlを使用するPCRチューブに移す。
2) 他のサンプルとともにサーマルサイクラーにセットする。

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PCR用ポジティブコントロール PCRCheckerの使用例

PCR用ポジティブコントロール PCRChecker 使用例:試薬の入れ忘れ PCR用ポジティブコントロール PCRChecker 使用例:適切でないサイクルプログラム
図1 試薬の入れ忘れ
レーン1:マーカー(DynaMarker for Plasmid (#DM132))
レーン2: PCRChecker
レーン3: PCR試料(ポリメラーゼの入れ忘れ)
レーン4: PCRChecker
レーン5: PCR試料

図2 適切でないサイクルプログラム
レーン1:マーカー(DynaMarker for Plasmid (#DM132))
レーン2: PCRChecker(Cycle Program 1)
レーン3: PCR試料(Cycle Program 1)
レーン4: PCRChecker(Cycle Program 2)
レーン5: PCR試料(Cycle Program 2)

図2のサイクルプログラム

Cycle Program 1 Cycle Program 2
Initial Heating
(サイクル前熱変性)
95℃、2.5 min 95℃、2.5 min
サイクル数:25 95℃、30 sec 95℃、30 sec
55℃、30 sec 55℃、30 sec
72℃、30 sec 72℃、 6 min
Final Extention
(最後の伸長条件)
72℃、10 min 72℃、10 min

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PCR用ポジティブコントロール PCRCheckerの価格

[在庫・価格 :2024年04月25日 17時55分現在]

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PCRChecker
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  • 商品コード:DC101
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関連製品:DynaMarker DNA for Plasmid D

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DynaMarker, DNA for Plasmid D

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  • 商品コード:DM132
  • メーカー:BDL
  • 包装:1set
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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