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Endothelial Tube Formation Assay (In vitro Angiogenesis)
in vitroでの血管形成・血管新生（Angiogenesis）の評価に有用です Endothelial Tube Formation Assay (In vitro Angiogenesis)
掲載日情報：2017/02/13 現在Webページ番号：62943
内皮細胞の血管形成を、in vitroで解析できるキットです。マウスEngelbreth-Holm-Swarm(EHS)肉腫から調製したECM(Extracellular Matrix)を用いることで、in vivoに似た3次元の環境で血管形成を行えます。in vivo実験前の血管形成・血管新生阻害物質のスクリーニングなどに有用です。
※その他のCell Biolabs社製品をお探しの方はこちらをご覧ください。
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特長
- キットに含まれるECMゲルは、マウスEngelbreth-Holm-Swarm(EHS)肉腫から調製されています。
- 血管は約18時間で形成されます。
- 本製品に含まれる染色試薬で血管を染色し、画像解析ソフトにより血管の長さや分岐点（ブランチポイント）の定量解析を行えます。
- キットには、96ウェルプレートで50回分のアッセイに必要な試薬が含まれています。
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使用例
本製品のECMゲルを用いHUVEC細胞の血管形成を解析した。
左図：プレートで培養したHUVEC細胞、右図：本製品で培養したHUVEC細胞
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操作方法概略
チューブ形成
- 氷上または冷蔵庫内で一晩静置して解凍したECM gel solutionおよび1×staining bufferを準備する。
- ECM gel solutionを予め冷却した滅菌済み96ウェルプレートに加え、37℃で30分～1時間インキュベートし、ゲルを形成させる。
- 内皮細胞を0.5～10％血清含有培地中に懸濁する。必要に応じて血管形成メディエーターなどを添加する。
- 細胞を2.のプレートに播種し、37℃で培養する。
蛍光染色
- 培地を除き、Staining bufferで洗浄する。
- Staining solutionを添加し、37℃で30分インキュベートする。
- PBSで洗浄後、蛍光顕微鏡観察とNIH ImageやImage Pro Plusなどの画像解析ソフトで細胞や血管を解析する。
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キット内容
- ECM gel solution
- Staining buffer
- Staining dye (Calcein AM)
※本製品に内皮細胞や培地は含まれていません。別途ご用意下さい。
※観察には光学顕微鏡と蛍光顕微鏡、解析には画像解析ソフトが必要です。
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月19日 18時15分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Endothelial Tube Formation Assay (In Vitro Angiogenesis Assay) (50assays) |
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[在庫・価格 ：2024年04月19日 18時15分現在]
Endothelial Tube Formation Assay (In Vitro Angiogenesis Assay) (50assays)
文献数： 11
- 商品コード：CBA-200
- メーカー：CBO
- 包装：1kit
- 価格：¥130,000
- 在庫：2個
- 納期：1週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
内皮細胞のチューブ形成を，in vitroで解析できるキット。ECM(Extracellular Matrix)を用いることで，in vivoに似た環境でチューブ形成を行える。In vivo実験前の血管形成・血管新生阻害物質のスクリーニングなどに有用。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2022年11月15日号 p.15 ニュース2021年9月15日号 p.18
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| 製品記事 |
Cell Biolabs（セルバイオラボ）社製品特集 |
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FAQ
Q-1. このキットはHUVEC以外の細胞にも使用できますか？
A-1.はい。どの内皮細胞にも使用できます。
Q-2.ECM gel solutionの組成は何ですか？
A-2.ECMはマトリゲルと同じく、マウスEngelbreth-Holm-Swarm (EHS)肉腫から調製されています。ラミニンを主成分とし、コラーゲンタイプⅣ、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、エンタクチンなどの成分が含まれています。増殖因子も含まれていますが濃度は測定していません。
Q-3.このアッセイ系で、血管新生メディエーターは必要ですか？
A-3.血管新生メディエーターを新たに添加しなくても血管形成は起こるため、必須ではありません。そのため、血管形成の阻害研究に有用ですが、血管形成の促進研究においては、経時観察を行わない場合、少々困難です。本キットに血管新生メディエーターは含まれていませんが、もし使用する際は、成分濃度の最適化を行う必要があります。最適な血管形成を行うためには、新鮮なHUVEC細胞を十分量（例：5×104 cells/well）播種して下さい。一般的に血管形成は、細胞数が多い方が良い結果が得られます。
Q-4.どのようにすればうまく血管形成を行えますか？
A-4.血管形成の改善法として以下の点が挙げられます。
1. インキュベーション時間をを12時間～一晩に変更します。一晩のインキュベーション後に最も血管形成が発現します。
2. ECMゲルは使用前に完全に融解して下さい。ゲルを4℃、24時間で融解し、ウェルに分注する直前にボルテックスをして下さい。ゲルの形成には30分～1時間を要しますが、完全にゲル化するため、必要であればプレートを37℃で1時間以上インキュベートしても構いません。ゲルの固化が不十分の場合、細胞が同じ範囲に留まらず、細胞間の相互作用やチューブ形成が低下します。
3. 一度細胞を添加したら、プレートを動かさないで下さい。血管形成に影響する場合があります。
Q-5.ウェル端での血管の密集を防ぐ方法はありますか？
A-5.ウェル端での血管形成は、ウェル端周辺の細胞濃度が高すぎることが原因と考えられます。この現象は、ウェル中の細胞数が不十分であることを示しているので、細胞数を増やして下さい。
Q-6.血管形成阻害物質は何がオススメですか？
A-6.例えばMMP阻害物質（GM6001）やPI3K阻害物質（Wortmannin）などを推奨します。
Q-7.どのように血管を計測すれば良いですか？
A-7.主に、面積あたりの血管本数または分岐点数、平均血管長などで示されます。
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