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総DNMT(DNAメチルトランスフェラーゼ)活性測定キット EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Easy /Ultra Kit

掲載日情報:2022/09/16 現在Webページ番号:6218

核抽出物中および精製酵素中のDNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)活性の総量を比色法または蛍光法により測定するキットです。EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Easy KitColorimetric)(#P-3139)は、従来のEpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Ultra KitColorimetric)(#P-3009)の改良版であり、操作が簡略化され、短い時間で結果を得ることができます。


DNMT活性測定の感度と特異性の検証例

  • 使用製品:EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Easy Kit(Colorimetric)(#P-3139)
Hela細胞株由来の核抽出物のDNMT活性測定例

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Hela細胞株由来の核抽出物のDNMT活性測定例

DNA methlase M.ssslのDNMT活性測定例

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DNA methlase M.ssslのDNMT活性測定例

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DNAのメチル化とは

DNAのメチル化と遺伝子発現の制御

DNAのシトシン環の5位の炭素にメチル基が共有結合的に付加することでDNAのメチル化が起こり、5-メチルシトシンが産生されます。これらのメチル基は、DNAの主溝に突出し、転写を阻害します。ヒトのDNAでは、5-メチルシトシンはゲノムDNAの約1.5%を占めており、主にCpG部位に見られます。通常は、遺伝子のプロモーター領域内またはその近くにCpGアイランドとして知られるDNAの0.3~2 kbストレッチにはCpG部位のクラスターがあり、そこで転写が開始されます。ゲノムDNAの大部分は、ほとんどのCpG部位が高度にメチル化されています。しかし、生殖系列の組織のCpGアイランドと正常な体細胞のプロモーターはメチル化はされず、遺伝子発現が起こります。遺伝子のプロモーター領域のCpGアイランドがメチル化されると、遺伝子発現が抑制されます。遺伝子発現の抑制は、特定の転写因子の結合を直接阻害するか、メチル-CpG結合タンパク質と関連する抑制的なクロマチンリモデリング活性によって間接的に起こります。DNAのメチル化は、遺伝子の転写への影響のほか、ゲノム刷り込み(genomic imprinting)にも関与します。これは、遺伝子の親由来の特異的発現とクロマチンドメインの形成を意味します。

DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)とは

DNAのメチル化は、正常細胞と異常細胞ではいくつか異なるレベルで制御されています。メチル基の付加は、酵素のファミリーであるDNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)によって行われます。遺伝子プロモーター付近のクロマチン構造も、DNAのメチル化と転写活性に影響を与えます。DNAのメチル化のパターンを確立および維持するには、3つのDNMT(DNMT1、DNMT3A、およびDNMT3B)が必要となります。さらにもう2つの酵素(DNMT2およびDNMT3L)も、より特異的ではあるものの関連する機能を持っている可能性があります。DNMT1は、DNAのメチル化の確立されたパターンの維持に関与していると見られていますが、DNMT3AとDNMT3Bは新しい、またはde novo DNAメチル化パターンの確立を媒介していると推定されます。DNMT3Lは、DNMT3AおよびDNMT3Bの機能に不可欠な、DNAメチルトランスフェラーゼの触媒的に不活性な調節因子であることがわかっています。

DNAのメチル化とがん細胞

がん細胞などの異常細胞では、DNMT1単独では異常遺伝子の過剰なメチル化を維持する要因とはならず、DNMT1とDNMT3Bの両方がこの機能に携わっている可能性がある点が異なると考えられています。局所的なクロマチン構造も、DNAのメチル化の制御に寄与しています。DNAのメチル化の情報が適切に確立、または維持されない場合に発生するヒトの疾患の増加に伴って、DNAのメチル化に関する研究の重要性が高まっています。DNMTの阻害は、脱メチル化およびサイレンシングされた遺伝子の発現に関与する可能性があり、DNMT阻害物質は抗がん剤として期待されています。

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測定原理

プレートにはDNMTファミリーに対してユニバーサルに作用するDNMTの基質がコートされています。DNMT酵素はメチル基をS-アデノシルメチオニン(AdoMet)からシトシンに転移してプレート上にコートされたDNA基質をメチル化し、産生したメチル化DNAを抗5-メチルシトシン抗体を用いてELISAに類似した原理で検出します。DNMTの酵素活性は、吸光度または蛍光強度と比例します。

DNAメチルトランスフェラーゼとS-アデノシルメチオニン(AdoMet)を介するDNA中のシトシンのメチル化

DNAメチルトランスフェラーゼとS-アデノシルメチオニン(AdoMet)を介するDNA中のシトシンのメチル化

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特長

  • DNMT 活性または阻害の測定に必要なすべての試薬が含まれています。
  • DNMT活性測定のほか、DNMT活性阻害物質の評価にも最適です。
  • 哺乳動物、植物、菌類、バクテリア、ウイルスなど幅広い生物種および、培養細胞、新鮮・凍結組織と幅広い試料由来のDNMT活性を測定できます。
  • 96 strip-well microplateフォーマットで、ハイスループットの分析にも最適です。

核抽出物の調製には、EpiQuik Nuclear Extraction Kit I(#OP-0002-1)のご使用をお勧めします。



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製品の種類

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay
Easy Kit(Colorimetric Ultra Kit(Colorimetric Ultra Kit(Fluorometric
アッセイ数 48 assays 96 assays 48 assays 96 assays 48 assays 96 assays
商品コード P-3139-48 P-3139-96 P-3009-48 P-3009-96 P-3010-48 P-3010-96
試料量 核抽出物 0.5~20 μg
(最適範囲5~10 μg)
0.2~10 μg
(最適範囲5~10 μg)
精製酵素 0.2~100 ng 0.5~200 ng 0.2~100 ng
測定方法 比色 蛍光
測定波長 450 nm(補正波長:655 nm) 励起 530 nm/蛍光 590 nm
インキュベーション時間 2時間10分 3時間45分
キット内容 Wash buffer
DNMT assay buffer
AdoMet
DNMT enzyme control
Capture antibody
Enhancer solution
8-well assay strips with frame
Adhesive covering film
Signal indicator
Detection antibody
Developer solution
Stop solution
Fluoro developer
Fluoro enhancer
Fluoro dilutor

Colorimetric Kit(#P-3139および#P-3009)の測定にはマイクロプレートリーダー、Fluorometric Kit(#P-3010)の測定には蛍光プレートリーダーが必要です。
キットにはDecitabineAzacitidineなどのDNMT阻害物質は含まれていません。



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操作方法概略

EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Easy /Ultra Kitのワークフロー

EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Easy /Ultra Kitのワークフロー

品名 EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay
Easy Kit(Colorimetric Ultra Kit(Colorimetric Ultra Kit(Fluorometric
手順 核抽出物または精製酵素を調製する。
基質をプレートウェルに加えて37℃で60~90分間インキュベートする。 基質とプレートウェルに加えて37℃で90~120分間インキュベートする。
ウェルを洗浄し、Detection complex solutionを加え、室温で50分間インキュベートする。 ウェルを洗浄し、Capture antibodyを加え、室温で60分間インキュベートする。
ウェルを洗浄し、発色基質を加えて呈色させ、吸光度(450 nm、補正波長:655 nm)を測定する。 ウェルを洗浄し、Detection antibodyとEnhancer solutionを順に加え、それぞれ室温で30分間インキュベートする。
発色基質を加えて呈色させ、吸光度(450 nm、補正波長:655 nm)を測定する。 蛍光基質を加えて呈色させ、得られた蛍光シグナル(Ex 530 nm/蛍光 590 nm)を測定する。

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使用例

EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Ultra Kit(Colorimetric)(#P-3009

EpiQuik Nuclear Extraction Kit I(#OP-0002-1)により調製したMCF-7細胞核抽出物のDMNT活性測定例

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EpiQuik Nuclear Extraction Kit I(#OP-0002-1)により調製したMCF-7細胞核抽出物のDMNT活性測定例

組換え体DNMT1の酵素活性測定例

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組換え体DNMT1の酵素活性測定例

EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Ultra Kit(Fluorometric)(#P-3010

組換え体DNMT1の酵素活性測定例

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組換え体DNMT1の酵素活性測定例

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価格

EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Easy Kit(Colorimetric Kit)

[在庫・価格 :2024年03月28日 17時15分現在]

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詳細 商品名
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納期 文献数
EpiQuik DNMT Activity/Inhibition ELISA Easy Kit(Colorimetric), 48 Assays
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 1
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[在庫・価格 :2024年03月28日 17時15分現在]

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EpiQuik DNMT Activity/Inhibition ELISA Easy Kit(Colorimetric), 48 Assays

文献数: 1

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EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Ultra Kit(Colorimetric Kit)

[在庫・価格 :2024年03月28日 17時15分現在]

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DNMT Activity/Inhibition Assay Ultra Kit, Colorimetric, EpiQuik (48assays)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 120
説明文
測定試料:核抽出物,精製酵素,測定範囲:1-50 ng/well,感度:0.5μ (nuclear extract), 0.5 n (purified enzyme),検出方法:呈色,測定波長:450 nm,アッセイ法:Ultra Assay,アッセイ数:48 assays
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
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10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 120
説明文
測定試料:核抽出物,精製酵素,測定範囲:1-50 ng/well,感度:0.5μ (nuclear extract), 0.5 n (purified enzyme),検出方法:呈色,測定波長:450 nm,アッセイ法:Ultra Assay,アッセイ数:96 assays
別包装品 別包装品あり
法規制等
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DNMT Activity/Inhibition Assay Ultra Kit, Colorimetric, EpiQuik (48assays)

文献数: 120

説明文 測定試料:核抽出物,精製酵素,測定範囲:1-50 ng/well,感度:0.5μ (nuclear extract), 0.5 n (purified enzyme),検出方法:呈色,測定波長:450 nm,アッセイ法:Ultra Assay,アッセイ数:48 assays
別包装品 別包装品あり
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文献数: 120

説明文 測定試料:核抽出物,精製酵素,測定範囲:1-50 ng/well,感度:0.5μ (nuclear extract), 0.5 n (purified enzyme),検出方法:呈色,測定波長:450 nm,アッセイ法:Ultra Assay,アッセイ数:96 assays
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EpiQuik DNMT Activity / Inhibition Assay Ultra Kit(Fluorometric Kit)

[在庫・価格 :2024年03月28日 17時15分現在]

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DNMT Activity/Inhibition Assay Ultra Kit, Fluorometric, EpiQuik (48assays)
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説明文
測定試料:核抽出物,精製酵素,感度:0.2μ (nuclear extract), 0.2 n (purified enzyme),検出方法:蛍光,測定波長:530/590 nm,アッセイ法:Ultra Assay,アッセイ数:48 assays
別包装品 別包装品あり
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保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
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測定試料:核抽出物,精製酵素,感度:0.2μ (nuclear extract), 0.2 n (purified enzyme),検出方法:蛍光,測定波長:530/590 nm,アッセイ法:Ultra Assay,アッセイ数:96 assays
別包装品 別包装品あり
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[在庫・価格 :2024年03月28日 17時15分現在]

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DNMT Activity/Inhibition Assay Ultra Kit, Fluorometric, EpiQuik (48assays)

文献数: 8

説明文 測定試料:核抽出物,精製酵素,感度:0.2μ (nuclear extract), 0.2 n (purified enzyme),検出方法:蛍光,測定波長:530/590 nm,アッセイ法:Ultra Assay,アッセイ数:48 assays
別包装品 別包装品あり
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文献数: 8

説明文 測定試料:核抽出物,精製酵素,感度:0.2μ (nuclear extract), 0.2 n (purified enzyme),検出方法:蛍光,測定波長:530/590 nm,アッセイ法:Ultra Assay,アッセイ数:96 assays
別包装品 別包装品あり
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保存条件 室温,4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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