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[掲載日情報:2016/08/31 現在]

アポトーシス研究試薬 <特集>

アポトーシスの研究に有用な製品をキットを中心にご紹介します。


MEMO

アポトーシスとネクローシス


アポトーシスとネクローシス

アポトーシスを起こした細胞は,クロマチンの凝集,DNAの断片化,細胞膜のブレブ(突起物)形成などの様々な形態変化を示し,周囲の貪食細胞に貪食・分解されます。ネクローシスを起こした細胞は,核,細胞質,リソソーム膜が分解し,最終的には細胞が膨張し,破壊されます。

アポトーシス研究用製品の種類

DNA断片化

 アポトーシスに伴って起こるクロマチン DNA のヌクレオソーム単位での断片化は, アポトーシスに特徴的な指標です。断片化された DNA の検出には, DNA ラダーをアガロースゲル電気泳動により検出する方法や, 標識された断片化 DNA の末端を特異的に標識し, 光学顕微鏡, 蛍光顕微鏡, フローサイトメーターなどを用いて検出する方法があります。

DNA断片化
ApoMark DNA Fragmentation Detection Kit 組織切片のアポトーシス検出キット
Apoptotic DNA Ladder Extract Kit / Detection Kit 断片化DNA 抽出キット
CometAssay Kit DNA 損傷を直接検出
CometAssay Silver Staining Kit 銀染色像として結果を保存できる
DNA Laddering Kit 断片化DNA抽出キット
NeuroTACS II in situ Apoptosis Detection Kit 神経組織や神経細胞のアポトーシスを検出キット
TACS2 TdT in situ Apoptosis Detection Kit TUNEL法によるアポトーシス検出用キット
TACS-XL in situ Apoptosis Detection Kit TUNEL法によるアポトーシス検出用キット
TACSキットシリーズ別売品
TiterTACS Quantitative Assay Kit アポトーシス検出キット
TumorTACS in situ Apoptosis Detection Kit 腫瘍組織および腫瘍細胞のアポトーシス検出キット
VasoTACS in situ Apoptosis Detection Kit 血管系細胞のアポトーシス検出に!

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細胞膜構造変化

正常な細胞では, 細胞膜の内膜と外膜でリン脂質に偏りがあります。ホスファチジルセリンなどの陰イオン性リン脂質は, 細胞膜の内膜に局在していますが, アポトーシスの初期段階では膜構造が変化し, 細胞外膜上に露出します。
こうした膜構造の変化の検出に, 露出したホスファチジルセリンに Ca2+ 存在下で特異的に結合するタンパク質, Annexin V が用いられます。ネクローシスでは膜構造が完全に崩壊し, Annexin V による染色は内膜にも及びますが, アポトーシス細胞では外膜のみとなります。
この変化は, DNA 断片化やクロマチン凝縮に先行して起こり, アポトーシス初期の検出に有用です。


細胞膜構造の変化と Annexin V の結合図

細胞膜構造の変化とAnnexin Vの結合
アポトーシスの初期に細胞膜構造が変化し, 正常細胞では脂質二重膜の内側に存在するホスファチジルセリンが細胞膜の外側に露出する。
その陰性荷電したリン脂質に Ca2+ 依存的に Annexin V が結合することを利用してアポトーシス細胞を検出する。

Annexin V Apoptosis Detection Kit 細胞膜構造変化に基づくアポトーシス検出キット
Multi-Parameter Apoptosis Assay Kit アポトーシス細胞/死細胞検出用キット

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ミトコンドリア膜電位消失

ミトコンドリア膜電位の消失はミトコンドリア膜上に局在する Bax の活性化により引き起こされます。
その結果, cytochrome c や AIF ( apoptosis inducing factor )が細胞質中に漏出し, アポトーシス特異的なプロテアーゼである caspase を活性化してアポトーシスを進行させます。
一方, ミトコンドリア膜電位消失を防ぎ, アポトーシス抑制に働く因子として Bcl - 2 や Bcl - XL が知られています。
ミトコンドリア膜電位の低下を検出するため, ミトコンドリア膜透過性の陽イオン性蛍光試薬を用いて, 蛍光強度や蛍光色の違いを観察する方法が一般的です。

ミトコンドリア膜電位消失
DePsipher Kit ミトコンドリア膜電位の消失を検出するキット
Dual Sensor MitoCasp アポトーシスを検出するキット
JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit ミトコンドリア膜電位差を蛍光検出
JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit ミトコンドリア膜電位消失によるアポトーシス検出キット
MitoCapture Mitochondrial Apoptosis Detection Kit ミトコンドリア膜電位の変化によりアポトーシスを検出するキット
Mitochondria Isolation Kit 組織からのミトコンドリア単離に!

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アポトーシス関連酵素活性

 caspase はアポトーシスシグナル伝達において中心的な役割を果たすシステインプロテアーゼです。
哺乳類では少なくとも 14 種類の caspase ファミリーに属する分子の存在が明らかになっています。

caspase は活性の低い前駆体( pro - caspase )として細胞内に存在し, 細胞死刺激を受けるとプロセシングされて活性型となります。アポトーシス誘導時には caspase ファミリーにより形成されるプロテアーゼのカスケードが活性化され, 細胞質または核内の基質を切断し, 細胞の形態的, 生化学的変化を引き起こします。
caspase 活性の測定法としては, 細胞抽出液中に caspase 特異的基質を加え, その切断活性を調べる方法が一般的です。


APO ACTIVE 3 Kit 活性化型caspase - 3 の検出キット
APO LOGIX Caspase Detection Kit アポトーシスを起こした細胞を高感度に検出
BioVision社Caspase関連キット別売品
CaspGLOW Active Caspase Staining Kit 活性型caspase検出キット
Caspase Assay Kit Caspase測定キット
Cathepsin Activity Assay Kit カテプシン活性測定キット
DNA Damage/PARP Assay Kit DNA損傷検出キット
PARG Assay Kit PARG 活性測定キット
Universal PARP Assay Kit PARP 活性測定キット

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その他の検出キット

ELISA 系ベースのアポトーシス検出キットなどがあります。

APOPercentage Apoptosis Assay Kit アポトーシスとネクローシスとの識別に有用なキット
Apo ssDNA Kit 抗ssDNA抗体を用いたアポトーシス細胞検出キット
ApoSENSOR Cell Viability Assay Kit ApoSENSOR ADP/ATP Ratio Assay Kit アポトーシス・クローシス・細胞増殖の判定を行えるキット
Cytochrome C ELISA Kit シトクロムc測定ELISAキット
Cytochrome c Releasing Apoptosis Assay Kit アポトーシス過程でのシトクロムcの転移を検出するキット
アポトーシス検出ELISA Kit アポトーシスを特異的に検出するユニークなツール
SensoLyte Cathepsin D Activity Assay Kit 蛍光によるCathepsin D 活性測定キット

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お問い合わせ先(テクニカルサポート 試薬担当)

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