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緑色から赤色へ変化する蛍光タンパク質 EosFP 発現ベクター

掲載日情報:2008/10/06 現在Webページ番号:3214

電子伝達系、アポトーシス、ミトコンドリア病の研究に ミトコンドリア(Mitochondria)研究用製品特集バナー

青紫色光の照射により、発する蛍光が緑色から赤色へ変化する蛍光タンパク質 EosFP を発現する発現ベクターです。EosFP を細胞内へ導入し、細胞の特定部位に変換光を照射することで、細胞内小器官やタンパク質の動態を追跡試験できます。

緑色から赤色へ変化する蛍光タンパク質 EosFP 発現ベクターのアフリカツメガエル胚を使用した細胞追跡試験

EosFP 発現ベクターの特長

  • EosFP はイシサンゴ Lobophyllia hemprichii 由来の蛍光タンパク質です。発現したタンパク質は緑色蛍光を示しますが、青紫色の光を照射することにより赤色蛍光へ変換されます。
  • 変換光の波長は 350 〜 440 nm(最適波長:390 nm)のため、一般的な DAPI フィルターや 405 nm のレーザーダイオード等を用いることができます。
  • 光変換は数秒間の照射で完了し、変換直後からすぐに赤色蛍光が観察できます。
  • EosFP タンパク質の蛍光は、標準的な緑色フィルター(光変換前)および赤色フィルター(光変換後)で観察できます。
  • EosFP の細胞への導入は、発現ベクターのトランスフェクションや、in vitro 転写反応で調製した mRNA、または精製した EosFP タンパク質のマイクロインジェクション等で行えます。
  • 細胞内における EosFP タンパク質の安定性は非常に高く、アフリカツメガエル胚での追跡試験は 14 日間、また HEK293 等の分裂培養細胞における赤色蛍光によるフローサイトメトリーは最長 9 日間行えます。
  • 野生型 EosFP(wt-EosFP)、Mitochondrial targeting signal が付加された EosFP および、融合タンパク質発現に最適な変異型 EosFP(td-EosFP)を含む 3 種類の発現ベクターがあります。
  • 各 EosFP cDNA は pcDNA3 ベクターにクローニングされており、哺乳動物細胞や in vitro でのタンパク質発現系に使用可能で、トランスフェクション後はネオマイシンによる薬剤選択等が行えます。
  pwt-EosFP ptd-EosFP pm-EosFP
光変換前
(励起/蛍光)
506 nm / 516 nm 506 nm / 516 nm 506 nm / 516 nm
光変換後
(励起/蛍光)
571 nm / 581 nm 569 nm / 582 nm 571 nm / 581 nm
オリゴマー形成 四量体 直列二量体(機能的単量体) 単量体


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pwt-EosFP, FLAG-tagged

野生型 EosFP が哺乳動物細胞発現ベクター pcDNA3 に組み込まれた発現ベクターです。発現したタンパク質には FLAG タグが付加されています。細胞や組織の標識に有用です。

pwt-EosFP, FLAG-tagged

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pwt-EosFP, with Mitochondrial targeting signal

Mitochondrial targeting signal が付加された EosFP の発現ベクターです。ミトコンドリアを効率的に標識できます。

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ptd-EosFP, FLAG-tagged

EosFP を他のタンパク質との融合タンパク質として発現する際に最適な ptd-EosFP 発現ベクターです。EosFP をタンデムダイマー(直列二量体)として発現するようにデザインされており、発現後に四量体を形成する野生型に比べて、融合タンパク質の発現・機能解析に、より適しています。発現したタンパク質には FLAG タグが付加されています。

核内タンパク質の標識

核内タンパク質の標識
EosFPをHistone2B(H2B:上段)またはRecombination signal binding protein(RBP:下段)との融合タンパク質として発現した。核領域内で光変換後、赤色の蛍光が融合したタンパク質によって異なる挙動を示す様子を観察した。

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pm-EosFP, Thermostable, FLAG-tagged

EosFPに改変を導入し、37℃での発現タンパク質の機能を発揮させるのに最適化させた製品です。単量体として発現するため、他のタンパク質との融合タンパク質として用いることができます。そのため、細胞内小器官やタンパク質の動態の追跡試験に、特に適しています。発現したタンパク質にはFLAGタグが付加されます。

pm-EosFP, Thermostable, FLAG-tagged

RBP-pm-EosFP, Thermostable(左)、Tubulin-pm-EosFP, Thermostable(右)を発現後、光変換を行い、それぞれのタンパク質の核局在を観察した。

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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