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血液、組織、細胞などのDNA試料の非メチル化シトシンをウラシルに変換するメチル化検出キット EZ DNA Methylation-Direct Kit
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：1100
血液、組織、細胞などの試料DNA 中の非メチル化シトシンを、亜硫酸水素塩により短時間でほぼ完全にウラシルに変換して精製するキットです。変換処理前にDNA 精製操作を必要とせず、細胞／組織試料をそのまま変換処理に使用できます。
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DNAメチル化について
DNAは、DNAメチルトランスフェラーゼと呼ばれる酵素の働きによって、5’-CG-3’のシトシン基（CpG）がメチル化されます。DNAのメチル化によって、遺伝子の発現や細胞の分化、発生といった様々な細胞内の働きを制御しています。また、DNAのメチル化は様々な疾患のバイオマーカーとしても注目されています。
また、DNA脱メチル化経路において中間体としての役割を担う5-ヒドロキシメチルシトシン（5-hmC）もまた、新しいエピジェネティックな調節を担っていると考えられています。
近年ではmRNA, tRNA, miRNAなど様々なRNA種においてもメチル化が起こり、RNAの安定性やmRNAの翻訳のような様々な過程の制御に影響を与えていることが示唆されています。
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メチル化DNA検出キットラインナップ
| 製品 | EZ DNA Methylation1、2 | EZ DNA Methylation-Gold3、4 | EZ DNA Methylation-Lightinig Kit3、5 | EZ DNA Methylation-Direct Kit | EZ DNA Methylation Startup Kit |
|---|---|---|---|---|---|
| 製品説明 | スタンダードタイプ | 迅速 | プリメイドの変換試薬を含み便利 | 細胞・組織を直接処理可能 | 初めての方に |
| 形状（溶出液量） | スピンカラム（≧10μl）、96ウェル（≧15μl）、MagBead（≧25μl） | スピンカラム（≧10μl） | |||
| 変換効率 | ≧99％ | ≧99％ | ≧99.5％ | ≧99.5％ | ≧99％ |
| 処理時間 | 12～16時間 | 3時間 | 1.5時間 | 4時間 | 4時間 |
| アプライ量 | 500pg～2μg DNA | 500pg～2μg DNA | 100pg～2μg DNA | DNA(≧50pg)、細胞(≧10)、血液、パラフィン包埋組織切片(FFPE) | |
※MagBeadのみオートクレーブ可。
※Startup Kitはメチル化コントロールプライマー付き。
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メチル化DNA検出キットは以下の解析システムで使用が推奨されています
対応するキットは上記「メチル化DNA検出キットラインナップ」一覧表中の商品名末尾の番号をご参照ください。
- Illumina Infinium and GoldenGate assay systems
- Sequenom MassARRAY EpiTYPER
- Epicentre EpiGnome Methyl-Seq kit
- Agilent Technologies SureSelect Methyl-Seq Target Enrichment System
- Roche NimbleGen SeqCap Epi Enrichment System
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特長
- 固形組織、培養組織、白血球、バフィーコート、生検標本、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション（LCM）から得られた試料、ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）試料などに使用できます。
- わずか 10 個の細胞、または 50 pg の DNA からの処理が可能です。
- 試料 DNA 中の非メチル化シトシンの 99.5％以上がウラシルに変換されます。ウラシル変換は非メチル化シトシン特異的で、メチル化シトシンの 99.5％以上が保護されて変換されません（図1 参照）。
- 高純度の変換 DNA が高い回収率（＞80％）で回収できます。
- 精製した変換 DNA は PCR で増幅後、エンドヌクレアーゼ処理、シークエンシング、メチレーションマイクロアレイなどによるメチル化 DNA 解析に有用です。
- チューブフォーマットと96 ウェルフォーマットの製品があり、更に96ウェルフォーマットの製品はプレートの深さが異なる 2 種類の製品があります（表1 参照）。
図1：変換反応後のDNA の塩基配列
5 番目のシトシンがメチル化されているDNA を本製品により変換し、PCR で増幅した後、
ダイレクトシークエンシングを行った。メチル化シトシン（5 番目）はシトシンのまま、
非メチル化シトシン（7, 9, 11, 14, 15 番目）はウラシルに変換されている。
表1：EZ-96 DNA Methylation-Direct Kit のBinding plate の仕様
| 商品コード | #D5022 | #D5023 |
|---|---|---|
| Binding plate | Silicon-A binding plate | Zymo-spin I -96 binding plate |
| 形状 | Shallow-Well | Deep-Well |
| Binding plate の高さ | 19 mm | 35 mm |
| Binding plate と Collectionplate を組み合わせた時の高さ | 43 mm | 60 mm |
| DNA 結合量／最小溶出量 | 5 μg／30 μl | 5 μg／15 μl |
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操作法概略
EZ DNA Methylation Kit シリーズ各キットの操作法概略
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キット内容
共通- Proteinase K and storage buffer
- M-digestion buffer
- M-dilution buffer
- CT conversion reagent
- M-solubilization buffer
- M-wash buffer
- M-reaction buffer
- M-binding buffer
- M-elution buffer
- M-desulphonation buffer
- Zymo-spin IC column
- Collection tube
- Collection plate
- Elution plate
- Conversion plate with pierceable cover film
- Silicon-A binding plate（#D5022）
- Zymo-spin I -96 binding plate（#D5023）
※ #D5022と#D5023でプレートの形状が異なります。詳細はEZ DNA Methylation Kitシリーズに関するFAQのQ-5をご覧下さい。
※96ウェルフォーマットの製品は、対応した遠心分離機およびローターが別途必要です。
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製品掲載誌のご紹介
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『実験医学別冊 エピジェネティクス実験スタンダード』（羊土社）にて 『実験医学別冊 エピジェネティクス実験スタンダード
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月26日 00時00分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
|
DNA Methylation-Direct Kit, EZ (50reactions) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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DNA Methylation-Direct Kit, EZ (200reactions) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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DNA Methylation-Direct Kit, EZ-96, Shallow-Well Format (2×96reactions) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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DNA Methylation-Direct Kit, EZ-96, Deep-Well Format (2×96reactions) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
[在庫・価格 ：2024年04月26日 00時00分現在]
DNA Methylation-Direct Kit, EZ (50reactions)
文献数： 0
- 商品コード：D5020
- メーカー：ZYR
- 包装：1kit
- 価格：¥53,000
- 在庫：3個以上
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
メチル化DNA検出キット。 |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | 室温 | 法規備考 | |||||
| 掲載カタログ |
ニュース2021年3月15日号 p.4 ニュース2020年5月1日号 p.6
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| 製品記事 |
EZ DNA Methylation-Startup Kit |
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| 関連記事 | |||||||
DNA Methylation-Direct Kit, EZ (200reactions)
文献数： 0
- 商品コード：D5021
- メーカー：ZYR
- 包装：1kit
- 価格：¥148,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
メチル化DNA検出キット。 |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | 室温 | 法規備考 | |||||
| 掲載カタログ |
ニュース2021年3月15日号 p.4 ニュース2020年5月1日号 p.6
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| 製品記事 | |||||||
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DNA Methylation-Direct Kit, EZ-96, Shallow-Well Format (2×96reactions)
文献数： 0
- 商品コード：D5022
- メーカー：ZYR
- 包装：1kit
- 価格：¥120,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
96ウェルプレートフォーマットで非メチル化シトシンを亜硫酸水素塩により短時間でウラシルに変換して精製するメチル化DNA検出キット。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 室温 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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DNA Methylation-Direct Kit, EZ-96, Deep-Well Format (2×96reactions)
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- 商品コード：D5023
- メーカー：ZYR
- 包装：1kit
- 価格：¥120,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
96ウェルプレートフォーマットで非メチル化シトシンを亜硫酸水素塩により短時間でウラシルに変換して精製するメチル化DNA検出キット。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 室温 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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