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Cytoskeleton, Inc.
サイトスケルトン / Cytoskeleton, Inc.
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[掲載日情報:2016/08/01 現在]

リン酸化チロシン,SUMO化2/3 やユビキチン化タンパク質の濃縮用キット Signal-Seeker Phosphotyrosine / SUMOylation 2/3 / Ubiquitination Enrichment Kit

アフィニティービーズを用いて,細胞や組織中のチロシンリン酸化タンパク質,SUMOylation 2/3タンパク質 またはユビキチン化タンパク質を濃縮できるキットです。濃縮したタンパク質は,抗リン酸化チロシン抗体または抗ユビキチン抗体を用いたウエスタンブロットにより分析できます。

本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。

Signal-Seeker操作法概略

Signal-Seeker Kitの操作フロー





MEMO

Signal-Seeker Enrichmentについて


シグナル伝達および細胞内で起こるその他の現象において,タンパク質の迅速かつ動的な調節が必要です。ほとんどの場合においてこれらの機構は,標的タンパク質の非常に小さな部分修飾が関与しており,タンパク質調節プロセスの把握は科学者にとって困難なものでした。リン酸化,ユビキチン化,SUMO化またはアセチル化が関与する重要な調節機構の解析は,歴史的に時間と労力を必要としていました。Cytoskeleton社はシグナル伝達機構に関与するタンパク質修飾の簡便かつ迅速な解析を可能とするため,キット内容の最適化を行い,わずか1日でタンパク質の内因性修飾の解析が行えるようになりました。

タンパク質の内因性修飾

Signal-Seeker Enrichment Kitの特長

  • キットに含まれる各試薬を最適化することにより,きわめて高い感度を実現しました。
  • 測定回数:30 assays
  • 適用:
    • 一過性の調節機構の研究
    • 複数経路のタンパク質シグナル伝達の測定
    • 標的タンパク質の新しい修飾の発見
    • 内因性または一過性発現タンパク質のシグナル伝達の測定

Signal-Seeker Enrichment Kitの使用例

■Signal-Seeker Phosphotyrosine Enrichment Kit(#BK160

(1) Phosphotyrosine Beadsのチロシンリン酸化タンパク質に対する特異性の検証例

特異性の検証例

pY-BSA:Phosphotyrosine-BSA conjugate
pS-BSA:Phosphoserine-BSA conjugate
pThr-BSA:Phosphothreonine-BSA conjugate

(2) ウエスタンブロットを用いた抗pY抗体(#APY03)のpY修飾タンパク質に対する特異性(左)の検証例。対象として抗pS抗体(中央)および抗pThr抗体(右)を用いた。

ウエスタンブロット

細胞ライセート20 μgを以下の条件で処理し,各抗体でウエスタンブロットを実施した。
pV:100 mMのH2O2活性化過バナジン酸(pervabadate:チロシンホスファターゼ阻害物質)を10分間未処理(-)/処理(+)。
Cal A:50 mMのカリキュリンA(calyculin A:セリン/スレオニン阻害物質)を1時間未処理(-)/処理(+)。

(3) チロシンリン酸化タンパク質に対するAPY03-beadsの特異性のウエスタンブロットによる検証例。
細胞ライセートは,Single-Seeker Phosphotyrosine Enrichment Kitを用いて免疫沈降を行った

ウエスタンブロット

左図:HeLa細胞を30分間,100 μMのH2O2により活性化したオルトバナジウム酸ナトリウムで未処理(-)/処理(+)。
右図:A431細胞を24時間無血清で飢餓状態とし,50 ng/mlのEGFで5分間未処理(-)/処理(+)。

■Signal-Seeker Ubiquitin Enrichment Kit(#BK161

(1) ユビキチン化Rac1の検出例

ユビキチン ウエスタンブロット

Swiss 3T3細胞を10 μMのプロテアーゼ阻害物質MG132で3時間処理し,Signal-Seeker Ubiquitin Enrichment Kitマニュアルに従ってBLASTバッファーで細胞ライセートを調製した。細胞ライセートの各300 μgを,細菌毒素CNF1で未処理(Lane 3)または3時間処理(Lane 4)し,抗Rac1抗体を用いてウエスタンブロットを行った結果,既報*1の通りCNF1処理によるRac1のモノおよびポリユビキチン化物を検出した。

Lane 1:3%細胞ライセート
Lane 2:コントロールビーズ+細胞ライセート
Lane 3:CNF1未処理
Lane 4:CNF1処理

*1 : Torrino S. et al., Developmental Cell, 21, 959~965 (2011).

(2) ユビキチン化p53/全タンパクの検出例

ユビキチン ウエスタンブロット

HeLa細胞を70%コンフルエントまで培養および採取し,BLASTバッファーを用いて溶解後,各アッセイ細胞ライセート500μgをSignal-Seeker Ubiquitin Enrichment Kitのマニュアルに従って処理した。ウエスタンブロットAは抗p53抗体でプローブしたものを示し,ウエスタンブロットBはブロットAをHRP標識抗ユビキチン抗体によりリプローブしたものを示す。ウエスタンブロットAでは,ユビキチン化p53が既報*2の通り明瞭に視認された。

Lane A1:2%細胞ライセート
Lane A2:ubiquitin affinity beadsを用いて濃縮したHeLa細胞ライセート500μgの免疫沈降物
Lane B1&2:ウエスタンブロットAをHRP標識抗ユビキチン抗体によりリプローブした結果

*2 : Jin L., et al., Onc. Rep., , 29, 1983~1990 (2013).

使用文献

こちら

Signal-Seeker Enrichment Kitのキット内容

商品コードをクリックすると,直接価格表がご覧いただけます。キット内容の●にリンクがあるものは,単品でご購入いただけます。残りのキット内容物は,原則として単品でご購入いただけません。

品名 Signal-Seeker
Phosphotyrosine
Enrichment Kit
Signal-Seeker
SUMOylation 2/3
Enrichment Kit
Signal-Seeker
Ubiquitin
Enrichment Kit
商品コード BK160 BK162 BK161
BLAST lysis buffer
BLAST dilution buffer
BLAST wash buffer
Protease inhibitor cocktail
Tyrosine phosphatase inhibitor
(Pre-activated sodium orhtovanadate)
De-ubiquitination inhibitor
(N-ethylmaleimide)
De-ubiquitination SUMOylation inhibitor
(N-ethylmaleimide & TPEN))
Phosphotyrosine affinity beads
SUMO-2/3 affinity beads 1
Ubiquitin affinity beads 1
Control beads
Anti-phosphotyrosine HRP antibody
Anti-SUMO-2/3- HRP antibody
Anti-ubiquitin HRP antibody
Precision Red advanced protein assay reagent
Bead elution buffer
DMSO
Chemiluminescent detection reagent A / B
Spin column
Spin column collection tube
BlastR filters

Signal-Seeker Enrichment Kitの価格

[在庫・価格 : 2017年12月15日 18時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
CYOサイトスケルトン
Cytoskeleton, Inc.

データシート

BK160-S

Signal-Seeker Phosphotyrosine Enrichment Kit (10 assays)

1kit

\55,000
(未発注)
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CYOサイトスケルトン
Cytoskeleton, Inc.

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BK160

Signal-Seeker Phosphotyrosine Enrichment Kit

1kit

\139,000
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Cytoskeleton, Inc.

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BK162-S

Signal-Seeker SUMOylation Enrichment Kit (10 assays)

1kit

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BK162

Signal-Seeker SUMOylation Enrichment Kit (30 assays)

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BK161-S

Signal-Seeker Ubiquitin Enrichment Kit (10 assays)

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Signal-Seeker Ubiquitin Enrichment Kit

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BK163-S

Signal-Seeker Acetyl-Lysine Enrichment Kit (10 assays)

1kit

\48,000
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BK163

Signal-Seeker Acetyl-Lysine Enrichment Kit (30 assays)

1kit

\141,000
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[在庫・価格 : 2017年12月15日 18時50分 現在]
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BK160-S

Signal-Seeker Phosphotyrosine Enrichment Kit (10 assays)

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アフィニティービーズを用いて,細胞や組織中のリン酸化チロシンを濃縮できるキットです。濃縮したタンパク質は,抗リン酸化チロシン抗体を用いたウエスタンブロッティングにより分析できる。測定回数:30 Assays。

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Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

4x300μl

\99,000
(未発注)
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CYOサイトスケルトン
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APY03

Anti-Phosphotyrosine Mouse Monoclonal Antibody

2x100μl

\81,000
(未発注)
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APY03-HRP

Anti-Phosphotyrosine-HRP, Mouse-Mono

100μl

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[在庫・価格 : 2017年12月15日 18時50分 現在]
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APY03-Beads

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4x300μl

\99,000
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保存条件法規制等
抗原種免疫動物交差性適用
標識Unlabeled性状吸収処理クラス
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クローン:27B10.4別包装品あり

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ASM01-S

Anti-SUMO-1 Mouse Monoclonal Antibody (Sample size)

25μl

--------
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ASM01

Anti-SUMO-1 Mouse Monoclonal Antibody

2x100μl

--------
CYOサイトスケルトン
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ASM23-S

Anti-SUMO-2/3 Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)

25μl

\22,000
(未発注)
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ASM23

Anti-SUMO-2/3 Mouse Monoclonal Antibody

2x100μl

\81,000
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ASM24-S

Anti-SUMO-2/3, Mouse-Mono (Trial Size)

150μl

\22,000
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ASM24

Anti-SUMO-2/3, Mouse-Mono

2x200μl

\81,000
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ASM24-Beads

SUMO-2/3 Affinity Beads

2x400μl

\99,000
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[在庫・価格 : 2017年12月15日 18時50分 現在]
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ASM01-S

Anti-SUMO-1 Mouse Monoclonal Antibody (Sample size)

25μl

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別包装品あり

保存条件法規制等
抗原種免疫動物交差性適用
標識Unlabeled性状吸収処理クラス
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ASM24-Beads

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\99,000
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UBA01-Beads

Ubiquitin Affinity Beads 1

4x220μl

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(未発注)
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CYOサイトスケルトン
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AUB01

Anti-Ubiquitin Mouse Monoclonal Antibody

2x100μl

\81,000
(未発注)
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[在庫・価格 : 2017年12月15日 18時50分 現在]
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UBA01-Beads

Ubiquitin Affinity Beads 1

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\81,000
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