試薬記事カテゴリー

BPS Bioscience Inc.
BPS バイオサイエンス / BPS Bioscience Inc.
[掲載日情報：2012/03/05 現在]

情報伝達経路のモニタリングに CRE / CREB Reporter Assay Kit
TCF / LEF Reporter Kit

ルシフェラーゼを用いた，培養細胞試料中のCRE / CREBまたはWnt /β-カテニンの情報伝達経路のモニタリングに最適なキットです。
CREBはcAMPに応答する認識配列（CRE）に結合する転写因子で，細胞内cAMPレベルの上昇によりCREと結合してCREBが活性化します。
また，Wntタンパク質は細胞表面レセプターに結合すると，細胞質内のβ-カテニンが安定化し，核へ移行します。β-カテニンは核内でTCF / LEF転写因子に結合し，Wnt応答遺伝子の転写や発現を誘導します。
本製品は応答配列が組み込まれたホタルルシフェラーゼレポーターベクター，およびネガティブコントロールベクターがセットになっています。

特　　長

  • 情報伝達経路に応答する哺乳動物細胞用のルシフェラーゼレポーターベクターです。
  • CRE / CREB Reporter Assay Kitでは最小プロモーターの上流にCRE応答配列が組み込まれており，細胞内cAMPレベルの上昇によりCREと結合してCREBが活性化し，ホタルルシフェラーゼ遺伝子の転写が誘導されます。
  • TCF / LEF Reporter Kitでは最小プロモーターの上流にTCF / LEF応答配列が組み込まれており，Wnt経路の活性化により，ホタルルシフェラーゼ遺伝子の転写が誘導されます。
  • レポーターベクターは，恒常的にウミシイタケ（Renilla）ルシフェラーゼを発現するベクターとあらかじめ混合してあり，トランスフェクション効率を確認するための内部コントロールとして使用できます。
  • キットにはネガティブコントロールとして，応答配列を持たないルシフェラーゼ非誘導性のベクターが，Renillaルシフェラーゼベクターと混合した状態で添付されています。経路特異的な効果およびバックグラウンドシグナルの確認に必須です。

※本製品は一過性のトランスフェクション用です。細菌の形質転換および増幅を目的とするものではありません。

適 用 例

  • 情報伝達経路の活性化のモニタリング
  • 情報伝達経路の活性化／阻害物質のスクリーニング
  • PKAの活性／阻害物質のスクリーニング（#60611)
  • 情報伝達経路におけるRNAiまたは遺伝子の過剰発現の効果検証

解析例（#60611）

CRE / CREB Reporter Assay Kit<br/>TCF / LEF Reporter Kit

forskolinに対するCREレポーター活性の用量反応曲線

図1：#60611に含まれるCREレポーターベクターをHEK293細胞にトランスフェクションし，各濃度のforskolin（cAMP誘導物質）に対するCREレポーター活性の用量反応曲線を作成した。forskolinのEC50値は3.3μgMと算出された。

CRE / CREB Reporter Assay Kit<br/>TCF / LEF Reporter Kit

図2：#60611に含まれるレポーターベクターをHEK293細胞にトランスフェクションし，PDE4D7（cAMP阻害物質）によるforskolin誘導性cAMP応答活性の阻害およびrolipram（PDE4阻害物質）による回復効果を検証した。

解析例（#60500）

CRE / CREB Reporter Assay Kit<br/>TCF / LEF Reporter Kit

TCF / LEFレポーター活性の用量反応曲線

図3：#60500に含まれるレポーターベクターをHEK293細胞にトランスフェクションし，各濃度のマウスWnt3aに対するTCF / LEFレポーター活性の用量反応曲線を作成した。マウスWnt3aのEC50値は16 ng/mlと算出された。

CRE / CREB Reporter Assay Kit<br/>TCF / LEF Reporter Kit

図4：#60500に含まれるレポーターベクターをHEK293細胞にトランスフェクションし，IWR-1-endo（Wnt応答阻害物質）によるWnt3a誘導性のTCF / LEF応答活性の阻害効果を検証した。

CRE / CREB Reporter Assay Kit<br/>TCF / LEF Reporter Kit

図5：図4の結果を元に，各濃度のIWR-1-endoに対するレポーター活性（％）の用量反応曲線を作成した。IC50値は0.05μMと算出された。

キット内容

  • Reporter（Component A）：Luciferase reporter vector＋Constitutively Renilla luciferase vector
  • Negative control reporter（Component B）：Non-inducible luciferase reporter vector＋Constitutively Renilla luciferase vector

※検出にはDual Luciferase Assay System（Promega社）が必要です。
※キットにトランスフェクション用試薬は含まれていません。別途ご用意下さい。

[在庫 ： 2013年05月20日 23時00分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
BPSBPS バイオサイエンス
BPS Bioscience Inc.

60500

TCF/LEF Reporter Kit

1kit

\87,0001個追加
BPSBPS バイオサイエンス
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60611

CRE/CREB Reporter Assay Kit

1kit

\87,0001個追加
[在庫 ： 2013年05月20日 23時00分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
BPSBPS バイオサイエンス
BPS Bioscience Inc.

60500

TCF/LEF Reporter Kit

1kit

\87,0001個追加
    		説明文

    アッセイ法：Reporter Kit，アッセイ数：96 well，検出方法：蛍光，測定波長：励起：475～495 nm, 蛍光：518～538 nm，種交差性：Human

    保存条件-20℃法規制等
    Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
    掲載カタログ

    ニュース 2012年5月15日号（No.515） p.23
    ニュース 2011年12月 1日号（No.504） p.11

    製品記事

    CRE / CREB Reporter Assay Kit
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    1kit

    		\87,0001個追加
      		説明文

      アッセイ法：Reporter Assay，アッセイ数：96 well，検出方法：化学発光，種交差性：Human

      保存条件-20℃法規制等
      Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
      掲載カタログ

      ニュース 2012年5月15日号（No.515） p.23

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      ※TCF / LEF応答配列とルシフェラーゼ遺伝子が組み込まれたHEK293由来細胞株もあります。詳細はフナコシホームページをご覧下さい。

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