試薬記事カテゴリー

SYGNIS AG
シグニス / SYGNIS AG
Webページ番号:
[掲載日情報:2018/01/05 現在]

少量の精製セルフリーDNAの増幅を行えるキット TruePrime Liquid Biopsy ctDNA Amplification Kit

血漿,血清,尿,脳脊髄液などの液体生検試料(Liquid Biopsy)から精製したセルフリーDNAの増幅を行えるキットです。セルフリーDNA中に含まれる腫瘍細胞由来の長鎖DNA断片(循環腫瘍細胞由来DNA:ctDNAが主成分)を優先的に増幅するため,本キットで増幅したDNAを用いての腫瘍マーカーDNAの解析に有用です(下記,使用例参照)。

本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。
全ゲノム増幅(WGA)率を迅速に確認できるPCRキットCovCheckについてはこちらをご覧下さい。

使用例

使用例

S状結腸未分化腺がん(ステージ:T4a M1a L1 G4)患者の腫瘍生検由来DNAおよびセルフリーDNAを用いて,がん関連50遺伝子についてSNV(一塩基多様性)をシークエンシングにより確認した。
未増幅のセルフリーDNA(右)と比べて,本キットで増幅したセルフリーDNA(左)は,検出された腫瘍生検由来DNAの割合,カバー率が高いことが判る。

特長

  • 100 pgのセルフリーDNAから,再現性高く増幅DNAを得られます。
  • 合成ランダムプライマーを用いないため,これに起因する不規則な伸張反応による影響がありません(MEMO参照)。
  • バイアスが少なく,かつゲノムのカバー率が高い増幅DNAが得られ,PCR,次世代シークエンシングでの使用に適しています。
  • 得られた増幅DNAは異なるシークエンシング法を用いて解析しても,SNV(一塩基多様性)および各SNVの存在頻度が保たれています。
  • がん発生,がん再発検出用の新規マーカー候補となりうる,血漿試料中に含まれる未知の腫瘍由来DNAの探索にも有用です。

MEMO

TruePrimeテクノロジーとは


Phi29 DNA polymeraseを用いたDNA増幅方法はMultiple strand Displacement Amplification (MDA)法と呼ばれ,単一細胞からの均一なDNA増幅が可能な方法として注目されています。しかし,合成ランダムプライマーを使用することから,プライマー由来のバイアスが生じることが知られています。

SYGNIS社は,Phi29 DNA polymerasと新規のDNAプライマーゼTthPrimPolを組み合わせ,ランダムプライマーによるアーティファクトや,外部DNA汚染の影響を低減したキットを開発しました。

TruePrimeシステムによるDNA増幅の模式図
  1. TthPrimPolプライマーゼ(赤四角)が変性DNAの異なる部位に結合する。
  2. TthPrimPolが,短いDNAプライマーを合成する。
  3. Phi29 DNAポリメラーゼ(青丸)がTthPrimPolと置き換わり,合成を開始する。
  4. Phi29 DNAポリメラーゼが,鎖置換を起こす。
  5. TthPrimPolが新生DNAに結合し,新しいDNAプライマーを合成する。
  6. Phi29 DNAポリメラーゼがTthPrimPolと置き換わり,DNAプライマーと結合し,合成を開始する。

参考文献

  • Zafar M. K., et al, Biochemistry, 53 (41), 6584-6594 (2014).
  • Helleday T., Nat. Struct. Mol. Biol., 20, 1348-1350 (2013).
  • Garcia-Gomez S., et al, Mol. cell, 52 (4), 541-553 (2013).

操作方法概略

プライマーを用いず少量の精製ゲノムDNAから全ゲノム増幅を行えるキットの操作方法
  1. 精製DNA試料とLysis bufferを加える。
  2. 室温で3分間インキュベートする。
  3. Neutralization bufferを加え中和する。
  4. Amplification mixを加える。
  5. 30℃で3時間インキュベーションする。
  6. 65℃で10分加熱し酵素を失活させる。

キット内容

  • Buffer D, N
  • Reaction buffer
  • dNTPs
  • H2O
  • Enzyme 1, 2

液体生検試料からセルフリーDNAを精製するキットおよび,本キットで増幅したDNAの定量に用いるキット・装置等が別途必要です。

価格

[在庫・価格 : 2018年01月19日 10時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
SYNシグニス
SYGNIS AG

データシート

330025

TruePrime Liquid Biopsy ctDNA Amplification Kit (25reactions)

1kit

\158,000
(未発注)
追加
[在庫・価格 : 2018年01月19日 10時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
SYNシグニス
SYGNIS AG

330025

TruePrime Liquid Biopsy ctDNA Amplification Kit (25reactions)

1kit

\158,000
(未発注)
追加
説明文

血漿,血清,尿,脳脊髄液などの液体生検試料(Liquid Biopsy)から精製したセルフリーDNAの増幅を行えるキット。ランダムプライマーを用いないため,ランダムプライマーによるアーティファクトや外部DNA汚染の影響を低減できる。

保存条件法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

製品記事

TruePrime Liquid Biopsy ctDNA Amplification Kit

関連記事

関連製品:CovCheck

全ゲノム増幅(WGA)率を迅速に確認できるPCRキットです。