試薬記事カテゴリー

System Biosciences, LLC
システムバイオサイエンス / System Biosciences, LLC
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[掲載日情報:2017/10/12 現在]

クロマチン構造の遺伝子発現制御解析に CLOuD9 Gene Expression Regulation Kit

哺乳動物細胞において,ゲノム中の任意の場所に可逆的かつ誘導性のクロマチンループ構造を形成させることができるキットです。キットにはdCas9-PYL1およびdCas9-ABIを細胞内において発現するためのレンチウイルスベクターが含まれています。これらのベクターに任意の標的部位に結合するgRNA配列を組み込んだ後,細胞に導入し,設定した標的部位に結合するdCas9融合遺伝子を発現させます。産生されたdCas9-PYL1およびdCas9-ABIは,誘導化試薬を添加することで結合し,クロマチンループ構造を形成します。クロマチン構造の動的変化による遺伝子発現の制御(亢進・抑制)の研究などに有用です。
CLOuD9:Chromatin Loop Reorganization using CRISPR-dCas9

原理

本システムでは,Cas9に変異を導入しDNA切断活性を欠損させたもの(dCas9)を標的部位特異的なDNA結合タンパク質として利用します。黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)および化膿レンサ球菌(S. pyogenes)由来の2種類のdCas9を用いるため,それぞれに対応した配列のgRNAが使用でき,ゲノム中の任意の2ケ所を標的部位として設定できます。
設定した標的gRNA配列を組み込んだdCas9発現レンチウイルス2種類を哺乳動物細胞に導入すると,それぞれのdCas9は植物由来タンパク質ABIおよびPYL1の二量体化領域との融合タンパク質として発現し,標的部位に結合します。
培地中に植物ホルモンのアブシシン酸(ABA)を添加することにより,ABIとPYL1が結合し,クロマチンループ構造を形成させることができます。また細胞を洗浄してABAを除くことにより,ループ構造の解消を行えます。

クロマチンループ構造

参考文献:
Morgan, S. L., et al., Nat. Commun., 8 ,15993 (2017).

特長

  • クロマチンループ構造の形成部位を任意に設定できます。
  • 誘導化試薬の添加・洗浄除去操作により,クロマチンループ構造の形成・解消を可逆的に誘導できます。
  • クロマチンループ構造の形成・解消の誘導に,植物のABAストレス経路を利用しています。
  • クロマチン構造が関与する細胞の内在性遺伝子の発現制御の研究に使用できます。
  • 遺伝子発現制御におけるクロマチン構造の関与についての研究,発生学研究,がん研究などに有用です。

使用例

使用例

本システムを用いて,2種類の異なる遺伝子領域でクロマチンループ構造を形成し,それぞれの遺伝子発現量の変化を調べた。
図A:β-globin遺伝子部分でクロマチンループ構造を形成した(K562細胞および293T細胞)。
K562細胞ではβ-globin発現量が増大したが,293T細胞では有意な差がなかった。
Inducer only:誘導化試薬を添加して,それぞれ記載の時間(24,72時間)インキュベートした。
Inducer + washout:インキュベート(24,72時間)後に洗浄を行い,その後に更に同じ時間(24,72時間)インキュベートした。

図B:Oct4遺伝子部分でクロマチンループ構造を形成した(HEK293T細胞)。
誘導化試薬を添加した細胞において,Oct4発現量の増大が確認された。

ベクターマップ

ベクターマップ

キット内容

  • U6-gRNA scaffold-EF1a-dCas9-PYL1-P2A-Hygro lentiviral cloning vector
  • U6-gRNA scaffold-EF1a-dCas9-ABI-P2A-Puro lentiviral cloning vector
  • Inducer agent

ベクターへのgRNA配列のクローニング,組換えレンチウイルスの作製・細胞への導入など,各ステップにおいて必要な試薬類については製品プロトコルをご確認下さい。
また,関連製品については,それぞれ下記をご覧下さい。

関連製品

価格

[在庫・価格 : 2017年12月16日 09時45分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
SBIシステムバイオサイエンス
System Biosciences, LLC

データシート

CASCL9-100A-KIT

CLOuD9 Gene Expression Regulation Kit

1kit

\187,000
(未発注)
追加
[在庫・価格 : 2017年12月16日 09時45分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
SBIシステムバイオサイエンス
System Biosciences, LLC

CASCL9-100A-KIT

CLOuD9 Gene Expression Regulation Kit

1kit

\187,000
(未発注)
追加
説明文

哺乳動物細胞のゲノム中の任意の場所に可逆的かつ誘導性のクロマチンループ構造を形成させることができるキット。

保存条件法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

製品記事

CLOuD9 Gene Expression Regulation Kit

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■ 誘導化試薬の別売品

[在庫・価格 : 2017年12月16日 09時45分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
SBIシステムバイオサイエンス
System Biosciences, LLC

データシート

CASCL9-200A-1

CLOuD9 Inducer Reagent(1000X)

200μl

\56,000
(未発注)
追加
[在庫・価格 : 2017年12月16日 09時45分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
SBIシステムバイオサイエンス
System Biosciences, LLC

CASCL9-200A-1

CLOuD9 Inducer Reagent(1000X)

200μl

\56,000
(未発注)
追加
説明文

CLOuD9 Gene Expression Regulation Kitのキット構成品の別売品。

保存条件法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
掲載カタログ

製品記事

CLOuD9 Gene Expression Regulation Kit

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