試薬記事カテゴリー

Visikol Inc.
ビジコォル / Visikol Inc.
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[掲載日情報:2017/12/15 現在]

スフェロイド・細胞塊用の透明化試薬 Visikol HISTO-M

スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬です。スフェロイドなどについて,組織内部を蛍光プローブ検出や免疫染色による観察を行えるため,これらをモデル組織として用いた創薬研究に有用です。

各種組織切片用の透明化試薬Visikol HISTOについてはこちらをご覧下さい。
本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。

細胞生存率 アポトーシス
細胞接着 組織構造

本製品で透明化した試料を用いて,各種アッセイを行った。
左上:細胞生存の観察(Calcein AM染色),右上:アポトーシス検出(抗Caspase-3抗体)
左下:細胞接着の観察(抗E-cadherin抗体),右下:組織構造の全体像(H&E染色)

Memo

組織培養試料の観察について

スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)などはモデル組織として,ハイスループットな創薬研究に幅広く用いられています。
しかしながらイメージングを行う際に,通常はスフェロイド全体をガラススライドに貼り付けるホールマウントを行うため,スフェロイド表面のみしか測定を行えません。また,スフェロイド内部の情報を得るために,スフェロイドを連続切片として切断する手法もありますが,作製が困難かつ,多くの作業時間を要します。

Visikol HISTO-Mでスフェロイドを透明化した後,ハイコンテントイメージングシステムなどを用いて測定を行うことにより,スフェロイド内部を含む3Dデータが得られます。

特長

  • 細胞形態を損なうことなくスフェロイドなどを透明化でき,内部を含む3Dデータが得られます。
  • 蛍光プローブによる検出や免疫染色と組み合わせての測定が可能です。
  • 96ウェルプレートを用いたハイスループット解析に適しています。
  • 96ウェルプレートの1ウェルあたりの使用量は0.1 mlです(30 ml製品で,96ウェルプレート約3枚分)。
  • 免疫染色の前処理に用いる各種バッファーをセットにしたStarter Kitもあります。
  • 屈折率:1.50
  • 粘度:148 cP (Brookfield Spindle HA-02,100 rpm,22℃にて測定)
  • 組成:有機溶媒ベース

*本製品と組み合わせての使用を検証済みの核染色試薬:DAPI,Hoechst 33342,SYTOX stain(Thermo Fisher Scientific社),TO-PRO-3(Thermo Fisher Scientific社)

操作方法概略

操作方法概略
  1. 必要に応じて固定化・透過処理・賦活化処理を行った後,蛍光プローブ,抗体などで染色を行う。
  2. Visikol HISTO-Mで透明化する。
  3. ハイコンテントイメージングシステムなどを用いて測定後,データ解析を行い,3Dデータを得る。

使用例

広視野顕微鏡

図1:Microtissueをハイコンテント広視野顕微鏡で観察した例
NCI-H2170細胞(肺がん由来)から作製したMicrotissue(InSphero社)をSYTOX green(Thermo Fisher Scientific社)で核染色後,ハイコンテント広視野顕微鏡で観察した。
A:非透明化試料,B:Visikol HISTO-Mで透明化した試料
非透明化試料(A)では57個,透明化試料(B)では151個の細胞がカウントされた。

共焦点顕微鏡

図2:Microtissueをハイコンテント共焦点顕微鏡で観察した例
NCI-H2170細胞から作製したMicrotissueをSYTOX green(Thermo Fisher Scientific社)で核染色後,ハイコンテント共焦点顕微鏡(CX7,Thermo Fisher Scientific社)でZ軸位置(焦点距離)を移動させながら連続観察した。
A:非透明化試料,B:Visikol HISTO-Mで透明化した試料
非透明化試料(A)ではMicrotissue内部の細胞が光散乱により観察できないが,透明化試料(B)では観察できた。

細胞数のカウント

図3:Microtissue内の細胞検出と細胞数のカウント
NCI-H2170細胞から作製したMicrotissueを,100 nMのシスプラチンで処理後,Z軸位置20~120μmで連続測定し,画像解析ソフト(CellProfiler)を用いて細胞輪郭の検出と細胞数のカウントを行った。
A:非透明化試料,B:Visikol HISTO-Mで透明化した試料
C:A,Bについて,それぞれのZ軸位置での平面における細胞数をカウントした。

用量反応曲線

図4:Microtissueのシスプラチン処理による用量反応曲線
NCI-H2170細胞から作製したMicrotissueを各種濃度のシスプラチンで処理後,連続測定・画像解析を行い,総細胞数に対するKi67陽性細胞数の割合(Ki67%)から増殖細胞の割合を求めた。

A:シスプラチン未投与のコントロール(Vehicle control)との比較による増殖細胞の相対的な割合
シスプラチン投与濃度の検出限界が非透明化試料では10μMに対し,透明化試料では1μM,IC50が非透明化試料では10.8μMに対し,透明化試料では5.38μMと,得られる値に有意な差があることが分かる。

B:増殖細胞率の絶対値
透明化試料と非透明化試料で得られる値に大きな差があり,非透明化試料では誤って高い増殖細胞率が得られていることが示唆される。

Microtissueの部位

図5:Microtissueにおける部位別でのシスプラチン処理による用量反応曲線
図4の透明化試料から得られたデータについて,Microtissueを中心部(Inner),中間部(Middle),外周部(Outer)に3分割して再解析した。
Microtissueの中心部(Inner)の増殖細胞率が,中間部(Middle),外周部(Outer)の値と大きく異なることが分かる。
このタイプの共培養したがん微小組織では,一般的に自己組織化の最中に繊維芽細胞が微小組織の中心部に移動する。中心部に増殖細胞がほとんど観測されないのは,そのためと考えられる。

価格

■ Visikol HISTO-Mスターターキット
Visikol HISTO-Mに免疫染色の前処理に用いる各種バッファーをセットにした製品です。各試薬・バッファーは,96ウェルプレート約3枚分となります。
【キット内容】

品名 Visikol HISTO-M
Starter Kit
商品コード HMSK-1
包装 1 kit
キット
内容
Visikol HISTO-M ●(30 ml)
Penetration buffer
Washing buffer
Blocking buffer
Antibody buffer
[在庫・価格 : 2018年01月17日 18時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
VSKビジコォル
Visikol Inc.

データシート

HMSK-1

Visikol HISTO-M Starter Kit

1kit

\73,000
(未発注)
追加
[在庫・価格 : 2018年01月17日 18時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
VSKビジコォル
Visikol Inc.

HMSK-1

Visikol HISTO-M Starter Kit

1kit

\73,000
(未発注)
追加
説明文

スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬に,免疫染色の前処理に用いる各種バッファーをセットにした製品。キット内容:Visikol HISTO-M(30ml),Penetration buffer,Washing buffer,Blocking buffer,Antibody buffer

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[在庫・価格 : 2018年01月17日 18時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
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データシート

HM-30

Visikol HISTO-M

30ml

\44,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
Visikol Inc.

データシート

HM-100

Visikol HISTO-M

100ml

\121,000
(未発注)
追加
[在庫・価格 : 2018年01月17日 18時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
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HM-30

Visikol HISTO-M

30ml

\44,000
(未発注)
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スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬。

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HM-100

Visikol HISTO-M

100ml

\121,000
(未発注)
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スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬。

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■ バッファー別売品

[在庫・価格 : 2018年01月17日 18時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
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データシート

HSK-AB-30

Visikol HISTO Antibody Buffer

30ml

\10,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
Visikol Inc.

データシート

HSK-AB-100

Visikol HISTO Antibody Buffer

100ml

\20,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
Visikol Inc.

データシート

HSK-BB-30

Visikol HISTO Blocking Buffer

30ml

\8,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
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データシート

HSK-BB-100

Visikol HISTO Blocking Buffer

100ml

\16,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
Visikol Inc.

データシート

HSK-PB-30

Visikol HISTO Penetration Buffer

30ml

\8,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
Visikol Inc.

データシート

HSK-PB-100

Visikol HISTO Penetration Buffer

100ml

\16,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
Visikol Inc.

データシート

HSK-WB-70

Visikol HISTO Washing Buffer 10X

70ml

\14,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
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データシート

HSK-WB-200

Visikol HISTO Washing Buffer 10X

200ml

\25,000
(未発注)
追加
VSKビジコォル
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HSK-ZB-30

Visikol HISTO Permeabilization Buffer

30ml

\8,000
(未発注)
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HSK-ZB-100

Visikol HISTO Permeabilization Buffer

100ml

\16,000
(未発注)
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[在庫・価格 : 2018年01月17日 18時50分 現在]
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HSK-AB-30

Visikol HISTO Antibody Buffer

30ml

\10,000
(未発注)
追加
説明文

免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,一次抗体・二次抗体の希釈に使用する。

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HSK-AB-100

Visikol HISTO Antibody Buffer

100ml

\20,000
(未発注)
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説明文

免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,一次抗体・二次抗体の希釈に使用する。

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Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
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HSK-BB-30

Visikol HISTO Blocking Buffer

30ml

\8,000
(未発注)
追加
説明文

免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に非特異的な染色を抑えるため使用する。

保存条件法規制等
Genbank NoGene Accession NoProtein Accession No
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HSK-BB-100

Visikol HISTO Blocking Buffer

100ml

\16,000
(未発注)
追加
説明文

免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に非特異的な染色を抑えるため使用する。

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HSK-PB-30

Visikol HISTO Penetration Buffer

30ml

\8,000
(未発注)
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,抗体が組織に浸透しやすくする。

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HSK-PB-100

Visikol HISTO Penetration Buffer

100ml

\16,000
(未発注)
追加
説明文

免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,抗体が組織に浸透しやすくする。

保存条件法規制等
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HSK-WB-70

Visikol HISTO Washing Buffer 10X

70ml

\14,000
(未発注)
追加
説明文

免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に使用する。

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HSK-WB-200

Visikol HISTO Washing Buffer 10X

200ml

\25,000
(未発注)
追加
説明文

免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に使用する。

保存条件法規制等
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HSK-ZB-30

Visikol HISTO Permeabilization Buffer

30ml

\8,000
(未発注)
追加
説明文

保存条件4℃,凍結禁止法規制等
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HSK-ZB-100

Visikol HISTO Permeabilization Buffer

100ml

\16,000
(未発注)
追加
説明文

保存条件法規制等
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