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Systasy Bioscience GmbH
シスタシー バイオサイエンス / Systasy Bioscience GmbH
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[掲載日情報:2017/08/16 現在]

分割型TEVプロテアーゼ用いたリガンド依存的タンパク質間相互作用解析システム targetSCREENER Assay Kit

splitSENSORと呼ばれる分割型TEVプロテアーゼを利用することにより,細胞外刺激に応答したレセプタータンパク質とその下流のシグナルタンパク質との相互作用を,ルシフェラーゼレポーターアッセイを用いて定量的に解析することができます。調節タンパク質-タンパク質間相互作用などの種々の現象を,定量的かつハイスループットに測定することができます。特にGタンパク質共役レセプターやレセプターチロシンキナーゼなど,薬物標的に対する化合物作用の評価に有用です。

本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。

本製品にはsplitSENSOR vectorが含まれています。ご購入の際には,「使用目的確約書」へのご記入が必要です。
営利団体・企業にご所属の方がご購入の場合,購入後2年間の使用に制限されます。2年以上使用される場合はライセンス契約が必要です。

タンパク質間相互作用

targetSCREENERアッセイの応用

転座,切断,劣化,修飾,リン酸化依存性タンパク質 - タンパク質間相互作用および他の調節されるタンパク質 - タンパク質相互作用などの様々な現象のモニタリングへの応用が可能です。

MEMO

splitSENSORテクノロジーとは


splitSENSORテクノロジーは,薬物標的活性を含む生細胞中の様々な現象をモニターできる簡便,高感度かつ応用性に優れたレポーターアッセイシステムです。この技術を利用したtargetSCREENER Assay Kitは,レセプターX-TEVプロテアーゼN末端領域(NTEV)発現プラスミド,シグナルタンパク質Y-TEVプロテアーゼC末端(CTEV)およびルシフェラーゼレポーター遺伝子発現用プラスミドで構成されています。これらのプラスミドを培養細胞(HEK293,U2OSまたはPC12細胞)に導入することにより,下記の2種類のタンパク質が発現します。

発現タンパク質:

  1. レセプタータンパク質X(または細胞内タンパク質X):NTEV:転写活性化補因子GV融合タンパク質
  2. 活性型レセプタータンパクXと相互作用を有するシグナルタンパク質Y:CTEV融合タンパク質

タンパク質間相互作用

細胞膜表面に発現したレセプタータンパク質X(Receptor X)が特定のリガンドに刺激されて活性型になると,細胞内のシグナルタンパク質Y(Cytos. Y)と結合します。その際,Receptor XとCytos. Yのそれぞれに融合されたNTEVとCTEVが接近し結合することにより,活性型TEVプロテアーゼを産生します。活性型TEVプロテアーゼは,レセプタータンパク質Xと融合した転写活性化補因子GV間の結合を切断し,GVを遊離します。その後GVは核内に移行し,ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現用プラスミド上のGV認識配列に結合することによりルシフェラーゼを発現します。発現したルシフェラーゼをルシフェラーゼレポーターアッセイによる化学発光量を測定することにより,リガンド-レセプターX-シグナルタンパク質Y間の相互作用を定量的に評価することができます。


タンパク質間相互作用解析システムの特長

  • レセプター(X)とシグナルタンパク質(Y)の相互作用のみがレポーターとして発現されるため,特定のシグナル経路に着目した解析をおこなうことができ,X-Y相互作用を阻害する創薬シードのスクリーニングに有効です。
  • ルシフェラーゼをレポーターにするため,高感度で定量性の高い実験系が構築できます。
  • 精製プラスミドで提供されるため,そのままトランスフェクションするだけでアッセイ構成できます。
  • 96ウェルフォーマットで実験が構築できるため,ハイスループットな創薬研究に最適です。

タンパク質間相互作用解析システムの適用

  • アゴニストやアンタゴニストの探索
  • タンパク質-タンパク質相互作用の阻害剤探索

タンパク質間相互作用解析システムの使用例

■EGF刺激依存的なERBB4-PIK3R1相互作用解析

ERBB4-PIK3R1相互作用

■EGF受容体阻害剤がERBB4-PIK3R1に与える影響

ERBB4-PIK3R1に与える影響

タンパク質間相互作用解析システムを用いた研究ターゲット

下に示した図は,それぞれのアッセイ群の代表例を示したものです。製品によっては,図に示した反応と異なるものがありますので,個々の製品のデータシートで製品の詳細をご確認下さい。

■targetSCREENER Assay Kitを用いた研究ターゲット一覧

GPCR Assay G Protein-coupled Receptor (GPCR) Assay
Epinephrine, Vasopressin, Dopamine, SerotoninまたはSomatostatinなどのGPCRアゴニストによるGPCRの活性化をモニターできるキットです。各種GPCRアゴニストによりGPCRとARRB2 (adapter β-arrestin)間の活性化が起こると,それぞれに含まれるNTEVとCTEVが融合してTEVプロテアーゼが活性化されます。それによりGAL4-VP16(GV)が放出され,核内に移行してFlucレポーター遺伝子のGV認識部位である10×UASに結合することで発現するルシフェラーゼを検出します。GPCRの活性化または阻害活性の定量的な分析が行えます。
RTK Assay Receptor Tyrosine Kinase (RTK) targetSCREENER Assay
EGF様ドメイン(EGFld)などのRTKアゴニストによりRTK ERBB3 / ERBB4の活性化をモニターできるキットです。RTKアゴニスト(EGFld-Nrg 1)によりRTK ERBB3 / ERBB4とアダプター間の活性化が起こると,それぞれに含まれるNTEVとCTEVが融合してTEVプロテアーゼが活性化されます。それによりGAL4-VP16(GV)が放出され,核内に移行してFlucレポーター遺伝子のGV認識部位である10×UASに結合することで発現するルシフェラーゼ定量します。RTKの活性化または阻害活性の定量的な分析が行えます。
FRB/FKBP  Assay FRB/FKBP Control targetSCREENER Assay
細胞膜に結合しているFRBドメイン(FKBP-binding domein of mTOR:TM-FRB)のアゴニストRapamycinによる活性化をモニターできるキットです。RapamycinによりFRBとアダプターの細胞質性FKBP間の活性化が起こると,それぞれに含まれるNTEVとCTEVが融合してTEVプロテアーゼが活性化されます。それによりGAL4-VP16(GV)が放出され,核内に移行してFlucレポーター遺伝子のGV認識部位である10×UASに結合することで発現するルシフェラーゼを定量します。RapamycinによるFRBの活性化または阻害活性の定量的な分析が行えます。

タンパク質間相互作用解析システムのキット内容

  • レセプターX発現用プラスミド*1
  • シグナルタンパク質発現用プラスミド
  • Firefly ルシフェラーゼ発現用プラスミド(pG10-Fluc:各キット共通)
  • アッセイ用細胞(オプション)*2

*1 ERBB3の活性化には,ERBB2とのヘテロダイマーの形成が必要であるため,targetSCREENER Assay Kit(#SYS-A044 / #SYS-A044C10)についてのみ,ERBB2発現プラスミド(pERBB2)がキットに含まれ,プラスミド計4種類でキットが構成されています。
*2 それぞれのアッセイ用細胞付属キットには標準で添付されています。

タンパク質間相互作用解析システムのラインナップ

商品コードをクリックすると製品の詳細な説明がご覧いただけます。
対応するプラスミドのマップはこちらをご覧下さい。

■G Protein-coupled Receptor (GPCR) Assay

Ligand G protein-coupled Receptor (X) Signal Protein (Y) Assay cell line 商品コード
Epinephrine ADRA1A ARRB2 SYS-A121
PC12 SYS-A121C10
ADRA2B ARRB2 SYS-A122
PC12 SYS-A122C10
U2OS SYS-A122C5
ADRA2C ARRB2 SYS-A123
PC12 SYS-A123C10
U2OS SYS-A123C5
ADRB2 ARRB2 SYS-A124
PC12 SYS-A124C10
U2OS SYS-A124C5
Vasopressin AVPR1A ARRB2 SYS-A131
PC12 SYS-A131C10
U2OS SYS-A131C5
AVPR2 ARRB2 SYS-A132
PC12 SYS-A132C10
U2OS SYS-A132C5
Dopamine DRD1 ARRB2 SYS-A111
U2OS SYS-A111C5
DRD2 ARRB2 SYS-A112
HEK293 SYS-A112C4
U2OS SYS-A112C5
DRD4 ARRB2 SYS-A114
HEK293 SYS-A114C4
U2OS SYS-A114C5
DRD5 ARRB2 SYS-A115
HEK293 SYS-A115C4
U2OS SYS-A115C5
Serotonin HTR2A ARRB2 SYS-A102
PC12 SYS-A102C10
HTR4 ARRB2 SYS-A104
PC12 SYS-A104C10
HTR5A ARRB2 SYS-A105
PC12 SYS-A105C10
Somatostatin SSTR2 ARRB2 SYS-A142
PC12 SYS-A142C10
U2OS SYS-A142C5
SSTR3 ARRB2 SYS-A143
PC12 SYS-A143C10
U2OS SYS-A143C5

■Receptor Tyrosine Kinase (RTK) targetSCREENER Assay

Ligand Receptor tyrosine kinase (X) Signal Protein (Y) Assay cell line 商品コード
EGF-like Domain (Nrg 1) ERBB3 (+ERBB2) SH2 (GBR2) SYS-A044
PC12 SYS-A044C10
ERBB3 ERBB2 SYS-A045
PC12 SYS-A045C10
ERBB4 PIK3R1 SYS-A041
PC12 SYS-A041C10
SH2 (SHC1) SYS-A042
PC12 SYS-A042C10
ERBB4 SYS-A043
PC12 SYS-A043C10

ERBB3の活性化には,ERBB2とのヘテロダイマーの形成が必要であるため,targetSCREENER Assay Kit(#SYS-A044 / #SYS-A044C10)についてのみ,ERBB2発現プラスミド(pERBB2)がキットに含まれ,プラスミド計4種類でキットが構成されています

■FRB/FKBP Control targetSCREENER Assay

Ligand Receptor tyrosine kinase (X) Signal Protein (Y) Assay cell line 商品コード
Rapamycin TM-FRB (mTOR) FKBP SYS-A003
PC12 SYS-A003C10
HEK293 SYS-A003C4

タンパク質間相互作用解析システムの価格

[在庫・価格 : 2017年09月22日 18時50分 現在]
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targetSCREENER assay - ADRA1A/ARRB2

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アドレナリン処理時にアドレナリン受容体(ADRA1A)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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targetSCREENER assay - ADRA2B/ARRB2

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アドレナリン処理時にアドレナリン受容体(ADRA2B)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞またはU2OS細胞が必要です。

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アドレナリン処理時にアドレナリン受容体(ADRA2C)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞またはU2OS細胞が必要です。

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アドレナリン処理時にアドレナリン受容体(ADRA2)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞またはU2OS細胞が必要です。

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targetSCREENER assay - AVPR1A/ARRB2

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バソプレッシン処理時にバソプレッシン受容体(AVPR1A)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞またはU2OS細胞が必要です。

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バソプレッシン処理時にバソプレッシン受容体(AVPR2)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞またはU2OS細胞が必要です。

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SYS-A112

targetSCREENER assay - DRD2/ARRB2

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ドーパミン処理時にドーパミン受容体(DRD2)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途U2OS細胞またはHEK293細胞が必要です。

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SYS-A112C4

targetSCREENER assay - DRD2/ARRB2 with HEK293 cell line

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SYS-A112C5

targetSCREENER assay - DRD2/ARRB2 with U20S cell line

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SYS-A114

targetSCREENER assay - DRD4/ARRB2

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ドーパミン処理時にドーパミン受容体(DRD4)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途U2OS細胞またはHEK293細胞が必要です。

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SYS-A114C4

targetSCREENER assay - DRD4/ARRB2 with HEK293 cell line

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SYS-A115

targetSCREENER assay - DRD5/ARRB2

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ドーパミン処理時にドーパミン受容体(DRD5)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途U2OS細胞またはHEK293細胞が必要です。

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SYS-A115C4

targetSCREENER assay - DRD5/ARRB2 with HEK293 cell line

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SYS-A102

targetSCREENER assay - HTR2A/ARRB2

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セロトニン処理時にセロトニン受容体(HTR2A)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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SYS-A102C10

targetSCREENER assay - HTR2A/ARRB2 with PC12 cell line

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SYS-A104

targetSCREENER assay - HTR4/ARRB2

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セロトニン処理時にセロトニン受容体(HTR4)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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SYS-A104C10

targetSCREENER assay - HTR4/ARRB2 with PC12 cell line

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SYS-A105

targetSCREENER assay - HTR5A/ARRB2

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セロトニン処理時にセロトニン受容体(HTR5A)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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SYS-A105C10

targetSCREENER assay - HTR5A/ARRB2 with PC12 cell line

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SYS-A142

targetSCREENER assay - SSTR2/ARRB2

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ソマトスタチン処理時にソマトスタチン受容体(SSTR2)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞またはU2OS細胞が必要です。

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SYS-A142C10

targetSCREENER assay - SSTR2/ARRB2 with PC12 cell line

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SYS-A142C5

targetSCREENER assay - SSTR2/ARRB2 with U2OS cell line

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SYS-A143

targetSCREENER assay - SSTR3/ARRB2

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ソマトスタチン処理時にソマトスタチン受容体(SSTR3)とarrestin (ARRB2)が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞またはU2OS細胞が必要です。

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SYS-A143C10

targetSCREENER assay - SSTR3/ARRB2 with PC12 cell line

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targetSCREENER assay - ERBB3 (+ERBB2)/SH2 (GRB2)

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targetSCREENER assay - ERBB3 (+ERBB2)/SH2 (GRB2) with PC12 cell line

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targetSCREENER assay - ERBB3/ERBB2

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targetSCREENER assay - ERBB4/PIK3R1

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targetSCREENER assay - ERBB4/PIK3R1 with PC12 cell line

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targetSCREENER assay - ERBB4/SH2 (SHC1)

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targetSCREENER assay - ERBB4/SH2 (SHC1) with PC12 cell line

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SYS-A043

targetSCREENER assay - ERBB4/ERBB4

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targetSCREENER assay - ERBB4/ERBB4 with PC12 cell line

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targetSCREENER assay - ERBB3 (+ERBB2)/SH2 (GRB2)

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EGF処理時にEGF受容体(ERBB3)とSHC1のSH2ドメインが直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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targetSCREENER assay - ERBB3 (+ERBB2)/SH2 (GRB2) with PC12 cell line

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targetSCREENER assay - ERBB3/ERBB2

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EGF処理時にEGF受容体(ERBB3)とERBB2が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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targetSCREENER assay - ERBB3/ERBB2 with PC12 cell line

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SYS-A041

targetSCREENER assay - ERBB4/PIK3R1

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EGF処理時にEGF受容体(ERBB4)とPIK3R1が直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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SYS-A041C10

targetSCREENER assay - ERBB4/PIK3R1 with PC12 cell line

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SYS-A042

targetSCREENER assay - ERBB4/SH2 (SHC1)

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EGF処理時にEGF受容体(ERBB4)とSHC1のSH2ドメインが直接相互作用したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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SYS-A042C10

targetSCREENER assay - ERBB4/SH2 (SHC1) with PC12 cell line

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SYS-A043

targetSCREENER assay - ERBB4/ERBB4

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EGF処理時にEGF受容体(ERBB4)がダイマー化したときのみ,ルシフェラーゼが発現するレポーターアッセイ構築キット,プラスミドでの提供で簡便かつハイスループットアッセイ系の構築に最適。別途PC12細胞が必要です。

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targetSCREENER assay - ERBB4/ERBB4 with PC12 cell line

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targetSCREENER control set

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SYS-A003C10

targetSCREENER control set with PC12 cell line

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SYS-A003C4

targetSCREENER control set with HEK293 cell line

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[在庫・価格 : 2017年09月22日 18時50分 現在]
メーカー 商品コード 商品名 包装 価格 在庫 リスト
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SYS-A003

targetSCREENER control set

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targetSCREENER assay のコントロールキット,各種targetSCREENER assayをご購入の際に合わせてご使用されることを推奨しています。別途PC12細胞またはHEK293細胞が必要です。

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SYS-A003C10

targetSCREENER control set with PC12 cell line

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targetSCREENER control set with HEK293 cell line

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targetSCREENER Assay Kitに用いられているプラスミドベクターの種類

下記画像をクリックすると各製品のプラスミドベクターをご覧いただけます。

ルシフェラーゼ発現用ベクター

Customizable targetSCREENER Assay (#SYS-A004)

任意のX-Yの組み合わせを構築できる受託サービスです。プラスミドの構築と最適細胞の選択までが含まれます。

■作製可能な組み合わせ

  • Membrane protein (X) - Membrane protein (Y)
  • Membrane protein (X) - Membrane-associated protein (Y)
  • Membrane protein (X) - Cytosolic protein (Y)
  • Membrane-associated protein (X) - Membrane-associated protein (Y)
  • Membrane-associated protein (X) - Cytosolic protein (Y)
  • Strictly cytosolic protein (X) - Cytosolic protein (Y)
  • X-Yの結合が実験的に確認されていない場合,作製できません。内容によっては,更に情報提供を求める場合があります。あらかじめご了承下さい。

    ご注文方法/価格

    • 価格は当社受託・特注品業務担当(下記参照)までお問い合わせ下さい。
    • 本製品にはsplitSENSOR vectorが含まれています。ご購入の際には,「使用目的確約書」へのご記入が必要です。

    営利団体・企業にご所属の方がご購入の場合,購入後2年間の使用に制限されます。2年以上使用される場合はライセンス契約が必要です。

    お問い合わせ先(受託・特注品業務担当)

    製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。

    表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

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