アポトーシス細胞／死細胞検出用キット | Multi-Parameter Apoptosis Assay Kit | アポトーシス細胞の検出／抽出キット | 細胞膜構造変化

: ケイマンケミカル / Cayman Chemical Company

[掲載日情報：2010/11/15 現在]

アポトーシス細胞／死細胞検出用キット Multi-Parameter Apoptosis Assay Kit

アポトーシスを起こした細胞や死細胞を検出できる各種試薬を使用して，単一細胞レベルで細胞死を検出できるキットです。フローサイトメーター，蛍光顕微鏡または蛍光プレートリーダーで検出します。

特長

キットには４種類の細胞染色用試薬が含まれています。

Annexin V FITC（緑色蛍光）：
アポトーシスを起こした初期段階の細胞では細胞膜構造が変化し，正常細胞では膜の内側に存在するホスファチジルセリンが外側に露出します。Annexin V は負電荷のリン脂質に特異的に結合するため，アポトーシスを起こした細胞を検出できます。
TMRE（赤色蛍光）：
ミトコンドリア膜電位感受性色素です。アポトーシスを起こした細胞ではミトコンドリアの膜電位消失が起こるため，TMRE はミトコンドリアに蓄積せず細胞質中に分散します。その局在の変化からアポトーシスを起こした細胞の検出が可能です。
7-AAD（赤色蛍光）：
細胞膜が損傷した死細胞の DNA 鎖にインターカレートし，赤色蛍光を発します。生細胞の細胞膜は透過できないため，死細胞のみを検出できます。
Hoechst Dye（青色蛍光）：
核の対比染色用試薬です。生細胞，死細胞どちらの核も染色できます。

染色試薬	励起	蛍光
Annexin V FITC	485 nm	535 nm
TMRE	520 ～ 570 nm	570 ～ 610 nm
7-AAD	555 nm	655 nm
Hoechst Dye	355 nm	465 nm

96 ウェルプレートを使用した際，フローサイトメーターで約 100 試料分，蛍光顕微鏡で約 500 試料分の試薬が含まれています。
Annexin V FITC と 7-AAD，TMRE と Hoechst Dye をそれぞれ使用前に混合して細胞染色を行います^＊。

＊ 7-AAD 用のフィルターセット（励起：555 nm／蛍光：655 nm）がない蛍光顕微鏡で検出する場合，7-AAD は使用できません。また， UV レーザー検出ができないフローサイトメーターで検出する場合， Hoechst Dye は使用できません。 Multi-Parameter Apoptosis Assay Kit

6 ウェルプレートに Jurkat 細胞（5 × 10⁴ 細胞／ウェル）を播種し一晩培養後，2.5 μg/ml Staurosporin を添加してさらに 5 時間培養した。本製品を用いて細胞染色を行い，蛍光顕微鏡で観察した。
Staurosporin 未処理のコントロール細胞では核が完全な形態を保ち（A），TMRE のミトコンドリアでの染色が見られる（B）。また，Annexin V FITC の染色は見られない（C）。 Staurosporin 処理によりアポトーシスを誘導した細胞では核が断片化して凝縮しており（D），TMRE がミトコンドリア膜電位の消失により分散してしまい染色が見られない（E）。また，ほとんどの細胞で Annexin V FITC の染色が確認でき（F），アポトーシスが進行している様子がわかる。

Multi-Parameter Apoptosis Assay Kit

6 ウェルプレートにJurkat 細胞（5 × 10⁶ 細胞／ウェル）を播種し一晩培養後，2.5 μg/ml Staurosporin を添加してさらに 5 時間培養した。本製品を用いて細胞染色を行い，フローサイトメトリーにより解析した。
Staurosporin 未処理のコントロール細胞では TMRE による強い染色が見られるが（A：左上領域），Annexin V FITC，7-AAD（B：右上，右下領域）による染色は見られない。 Staurosporin 処理によりアポトーシスを誘導した細胞では，ミトコンドリア膜電位の消失により TMRE での染色が減少しており（C：左上領域），ほとんどの細胞で Annexin V FITC の染色が見られる（D：右下領域）。この中には死細胞も含まれている（D：右上領域）